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嵌合猪圆环病毒的构建及其对仔猪的免疫原性 摘 要 猪圆环病毒（PCV ）具有PCV1 和 PCV2 两种基因型，PCV1 没有致病性，PCV2 则可引起猪断 奶后多系统消耗综合征等疾病。本研究通过克隆 PCV1 全基因组序列，构建出 PCV1 感染性 DNA 克 隆；通过构建嵌合PCV （PCV1-2 ）感染性DNA 克隆，获得生物纯 PCV1-2 ，并通过仔猪接种试验分 析了 PCV1-2 对仔猪的免疫原性。 用 PCR 技术扩增与克隆出 1 株 PCV1 全基因组，命名为 BJ-1 株。全基因组序列结果显示该株 与其它 PCV1 分离株的核苷酸同源性为 99.4%，主要开放阅读框（ORF ）序列结果显示其核苷酸同 源性在 92.7% 以上。虽然各个PCV1 分离株之间的全基因组与主要 ORF 的核苷酸同源性均很高，但 仍然呈现出一定的地域相关性。 将 PCV1 全基因组克隆入载体 pBluescript Ⅱsk （+ ），构建出PCV1 DNA 克隆，将其转染 PK-15 细胞系后获得拯救病毒 PCV1 。将拯救 PCV1 在 PK-15 细胞系连续培养 5 代后，其 TCID50 达到 6.55 10 /mL ，显示出较高的感染滴度。 用反向 PCR 技术缺失掉 PCV1 ORF2 ，并替换入 PCV2 ORF2 ，构建出嵌合猪圆环病毒 （PCV1-2 ） DNA 克隆，将其转染 PK-15 细胞系后获得生物纯 PCV1-2 。将 PCV1-2 在 PK-15 细胞系连续培养 5 6.05 代后，其 TCID50 达到 10 /mL ，表明获得了具有较高感染滴度的PCV1-2 。 将 PCV1-2 接种 35 日龄健康仔猪，观察仔猪的临床变化，用 ELISA 方法测定血清中 PCV2 ORF2 抗体，用常规和荧光定量PCR 技术测定血清与组织中PCV1-2 DNA 含量。结果显示，仔猪接种PCV1-2 后未出现可见的临床症状和大体病理变化，仔猪增重和饲料转化效率未受影响；血清中 PCV2 ORF2 抗体在接种后第 14 d 出现阳转，第28 d 时抗体阳性率达到 100%，表明PCV1-2 对仔猪具有良好的 免疫原性；血清中 PCV1-2 DNA 含量在接种后逐渐上升，第 28 d 时达到最高，之后迅速下降；第 35 d 宰杀时，仔猪肺门淋巴结中病毒含量最高，心脏的病毒含量最低；而常规 PCR 技术均难以检出 PCV1-2 DNA ，表明PCV1-2 接种后只引起仔猪的轻微感染。 综合分析表明，本试验成功构建出具有较高感染滴度和良好免疫原性的嵌合猪圆环病毒，为 PCV2 弱毒疫苗研发奠定了良好基础。 关键词：猪圆环病毒 1 型；猪圆环病毒 2 型；感染性 DNA 克隆；嵌合猪圆环病毒；免疫原性 I Construction and Immunogenicity to Piglets of Chimeric Porcine Circovirus Abstract Porcine circovirus (PCV) is divided into 2 genotypes, one is the nonpathogenic PCV type 1 (PCV1), another is the pathogenic PCV2, which is the primary causative agent of postweaning multisystemic wasting syndrome and other diseases. In this study, the complete genome sequence of one PCV1 was cloned, and its infectious DNA clone was construct