带科绦虫8ku断抗原蛋白基因家族的研究.pdfVIP

带科绦虫 8 ku 诊断抗原蛋白基因家族的研究 摘 要 目的：克隆和分析带科绦虫中牛带绦虫和细粒棘球绦虫的 8 ku 诊断抗原蛋白家族基因。① 从 分子水平上找出牛带绦虫 8 ku 诊断抗原蛋白家族基因各成员基因的变异规律，以此期望筛选出具有 潜在应用价值的抗原基因，阐明引起带科绦虫病（绦虫蚴病）血清学交叉反应的分子基础，也为带 科绦虫 8 ku 蛋白家族的分子进化分析提供资料。② 对棘球蚴的重要诊断基因 AgB1 和 AgB2 进行 克隆和表达，为下一步 AgB1 和 AgB2 抗原的血清学检测及效果评价奠定一定的基础。方法：① 以 牛带绦虫六钩蚴为对象从 DNA 水平和 cDNA 水平对 8 ku 蛋白家族基因进行克隆与序列测定，用分 子生物学软件对各序列进行同源性分析和带科绦虫 8 ku 蛋白家族基因分子系统进化树分析。② 以 青海源细粒棘球蚴为对象，采用 RT-PCR 方法对 AgB1 和 AgB2 基因进行克隆，构建原核表达系统 对其进行表达。结果：① 筛选了 224 个 8 ku 蛋白家族基因阳性克隆重组子，测序，通过序列比对 发现共存在 3 型 23 个不同基因序列，其中 A 型 2 个，阅读框大小为 216 bp ，编码 72 个氨基酸；B 型 2 个，阅读框大小为 249 bp ，编码 83 个氨基酸；C 型 19 个，阅读框大小为 258 bp ，编码 86 个氨 基酸。氨基酸序列同源性比对发现 TSA8KD-14 基因与其它成员基因序列差异很大，比较特殊。② 带 科绦虫 8 ku 蛋白家族基因分子系统进化树分析可以发现牛带绦虫TSA8KD-1 基因、TSA8KD-2 基因、 TSA8KD-3 基因、TSA8KD-4 基因、TSA8KD-5 基因、TSA8KD-11 基因、TSA8KD-12 基因和 TSA8KD-17 基因和猪囊虫重要诊断抗原基因 TsRS1、TsRS2 和 Ts14 亲缘关系很近。③ 克隆的 AgB1 、 AgB2 基因开放阅读框大小分别为 198 bp 和 213 bp ，以 GST 融合形式表达的蛋白约为 34 ku 。结论： ①首次克隆到牛带绦虫 8 ku 蛋白家族基因；② 牛带绦虫 TSA8KD-1 基因、TSA8KD-2 基因、 TSA8KD-3 基因、TSA8KD-4 基因、TSA8KD-5 基因、TSA8KD-11 基因、TSA8KD-12 基因和 TSA8KD-17 基因可能是牛带绦虫病的重要免疫诊断抗原基因；③ 与 Genebank 登录的AgB1 和AgB2 基因相比对，AgB1 的相似性为 97 %，AgB2 相似性为 100 %；④ AgB1 和 AgB2 最佳诱导表达条件 为：2×YT 培养基、诱导温度 37℃、IPTG 诱导剂量 0.1 mmol/L、诱导时间为 6 h 。 关键词：带科绦虫,8 ku 蛋白家族基因,AgB1 基因,AgB2 基因,诊断抗原 I Study on 8-kDa diagnostic Antigen Family Genes from Taeniidae Abstract Objectives: Clon and analysis the 8 ku protein family gene from Taenia saginata and Echinococcus granulosus . ① Potential valuable antigenic genes are expected to be found gene variation of Taenia saginata 8 ku protein family genes through molecular analysis, which provides information for molecular evolution analysis on TSA8 ku proteins of Taeniidae. ② Th