广西小土窝螺的糖体dna和线粒体基因组学研究.pdf

广西小土窝螺的核糖体DNA和线粒体基因组学研究 中文摘要 本论文的第一部分应用PCR扩增和DNA序列分析方法，以采 自广西梧州、桂林、北海、河池、南宁和百色等地的小土窝螺为研 究对象，对小土窝螺核糖体基因间隔区(ITS)进行了DNA遗传多 态性及种系发育分析，以期找到小土窝螺分子分类学、种群遗传关 系研究的遗传标记。结果表明：广西各地区的小土窝螺ITS序列的 螺科的螺体的相似度均低于55％，这说明广西地区的小土窝螺的种 内变异远小于与其他螺的种间差异，同时也说明了ITS．1和ITS．2 均可以作为种水平以上的遗传变异标记，可以用于小土窝螺与其他 椎实螺之间的鉴定。 本研究的第二部分建立了小土窝螺的特异性PCR鉴定方法。以 已获得的小土窝螺ITS．1基因序列，设计了小土窝螺的特异性引物 GP彬GPd，，用疑似截口土蜗、椭圆萝卜螺等作为对照螺。采用已建 立的特异性PCR检测方法对采自梧州、桂林、南宁等六地经过形态 学鉴定的共108份小土窝螺样品进行了检验。敏感性试验结果显示 最小DNA检测量为O．12ng。本检测方法具有特异、敏感、简便、快 捷等优点，对小土窝螺的种类的鉴定以及对吸虫类鉴别诊断和分子 流行病学调查具有重要的应用价值。 本论文的第三部分研究了小土窝螺的线粒体朋也基因和线粒体 I 全基因组。第一节对广西地区不同种群的小土窝螺线粒体的朋儿基 因部分序列进行PCR扩增、SSCP分析、测序及分析，结果得到有 效长度为273bp的p朋儿序列，其种群间变异为0．4．9％。而种系发 育分析显示不能将小土窝螺不同的种群区分开来，说明其不适合作 为小土窝螺的种群遗传标记。 第二节完成了小土窝螺的线粒体全基因组序列测定及分析。在 比较和分析肺腮亚纲的线粒体全基因组序列之后，利用倒1，胴L， 础船，嬲扰和咖共5个线粒体DNA小片段设计引物，采用长PCR 方法分别扩增出长度约2．7kb的5个有重叠序列的片段，经克隆转 化和测序后获得小土窝螺线粒体基因组的全序列，并对其结构特点， 及遗传进化关系进行分析。结果显示：小土窝螺的线粒体基因组全 A+T含量为72．67％；小土窝螺线粒体全基因组由 长为13768bp， 13个蛋白质基因、2个涨基因、22个tRNA基因组成。小土窝， 螺的线粒体全基因组中存在较多的小片段重叠区和基因间隔区。蛋 白编码基因排序方式与已报道线粒体全基因组的基眼目、柄眼目的 螺种完全一致，与柄眼目的螺种蒯铴聊勿∞砒仅是彩瞄和翮罐 基因位置颠倒，其他蛋白编码基因排列方式完全一致。在13个编码 蛋白质的基因中，以ATG和ATA作为蛋白质翻译的起始密码子； 多数蛋白质翻译的终止密码子为TAA，其次是TAG。 以钉螺为外群，以线粒体DNA序列作为遗传标记，重构了小土 窝螺的系统发育关系。结果显示：小土窝螺单独成一分支，与扁卷 螺关系最近。 H 本论文首次研究了小土窝螺的ITs及线粒体全基因组序列，研 究结果不仅丰富了腹足纲螺类的ITS及线粒体全基因组序列，同时 为对吸虫中间宿主螺类的遗传进化等方面的进一步研究奠定了基 础。 关键词：小土窝螺；核糖体内转录间隔区(ITS)；线粒体基因组；遗传变 异 m AND INITSrDNA ONPOLYMORPHISM STUDIES OF翻Z刎脚形彳IN IAI，GENOMES MITOCHONDR GUANGXI，CHINA Part inrI．SrDNA 1：Pol徊orphism asimpor