微囊藻毒素降解cj5厌氧降解mclr过程的研究.pdf

中文摘要 素，在水华水体环境中频繁出现，给生态系统及人类健康带来严重威胁。已有 研究表明，微生物降解是水环境中MCs去除的主要途径之一，并且有望用于水 环境中MCs污染的去除。已经从环境样品中分离并鉴定出40多株MCs降解菌， 对MCs的降解过程及机理也有了一定的认识。但是，目前关于MCs微生物降解 的研究大部分集中在好氧降解方面，且分离出的降解菌也大都为好氧降解菌， 对缺氧和厌氧条件下MCs的降解过程了解很少。 最新的研究结果表明，在缺氧厌氧条件下MCs也可以被湖泊沉积物中的土 著微生物迅速降解，说明该过程也是MCs在环境中归趋的一条重要途径。但是， 目前关于MCs厌氧降解过程的认识还很匮乏。本实验室从滇池沉积物中分离纯 化出一株MCs厌氧降解菌CJ5，其16SrDNA序列分析结果表明该菌为 Acidaminobacter sp．，它可以在厌氧条件下快速降解MCs。为了进一步深入了 解MCs的厌氧降解过程，本文以CJ5为研究对象，通过室内模拟实验，研究了 初始接种量、温度、pH值、外加碳氮源及初始MCLR浓度等条件对C35菌厌氧降 解MCLR的影响；通过提取CJ5菌的胞内酶和胞外酶并分别验证其MCLR降解活 mlrA基因，以推断其可能的降解途径。具体结果如下： 缓慢，分别经过了6天和8天的迟滞期后MCLR才开始降解，第20天时分别降 降解，12天内降解到检测限以下，而在酸性条件下MCLR降解缓慢，在pH为4．O 和5．O时．需要近20天的迟滞期后MCLR才开始降解，第40天才能降解到检测 限以下。外加碳源和氮源对CJ5厌氧降解MCLR无显著影响。 (2)酶活测试结果表明，CJ5菌中的MCs降解酶为胞内酶，这与已经报道 的MCs好氧降解菌的降解酶类似。CJ5菌粗酶降解MCs的过程中生成了一种新的 降解产物，该产物既不同于已报道的MCs好氧降解中间产物，也与CJ5菌降解 MCLR的产物Adda不同。由于该产物在238nm处有特征吸收峰，说明该产物含 有完整的Adda基团，这一结果说明CJ5菌的降解途径可能与目前已知的MCs好 氧降解途径不同。由于EDTA，PMSF，盐酸苯甲脒，胃蛋白酶抑制剂和胰蛋白酶 抑制剂均对CJ5菌粗酶降解MCLR无抑制作用，并且对该产物的产生和累积没有 影响，说明该产物可能是CJ5厌氧降解MCs的起始反应的初始产物。 果均未扩增出目标条带，而阳性对照样品可以扩增出相应条带，说明CJ5菌可 能不含川^基因。这一结果也进一步证明CJ5菌降解MCs的机理不同于已知的 ’ 好氧降解途径。 关键字：微囊藻毒素，厌氧降解菌，酶降解 n Abstract a of Microcystim(MCs)is group hepatotoxin heptapeptide produced by ale in cyanobacteria,whichdistributed widely water．Its eutrophic potent and tUlTlOr to hepatotoxicity have risks and promotionactivityposed ecosystem human has health．Itbeen that