猪a-干扰素单隆抗体的制备及其特性鉴定.pdf

摘要 IFN—Q(interferon alpha，IFN-Q)是在特定诱生剂的作用下由细胞产生的一 种具有生物活性的糖蛋白，可诱导同种动物细胞产生广谱的抗病毒活性。目前已发现 近百种疫病能通过动物传染给人，其中很多为病毒性传染病，有些目前尚未发现合适 的疫苗和药物来预防和治疗，有些对病毒的生物学特性仍未研究清楚。IFN-Q是抗 病毒能力最强的干扰素，但无论是医学还是兽医学领域对IFN-Q临床应用仍然极为 有限，因此开展IFN—Q单克隆抗体的研制，为评价机体抗病毒水平以及IFN-Q作用 机制研究奠定基础，对推动IFN-Q在临床上广泛应用具有重要作用。 本研究运用杂交瘤细胞技术，以重组猪IFN-a蛋白免疫BALB／c小鼠，无菌条件 双重筛选和多次克隆化培养，成功获得了3株能分泌抗IFN-Q的单克隆杂交瘤稳定 细胞株。用单克隆抗体亚型鉴定试剂盒鉴定其亚型，确定l株单克隆抗体为IgG2a， 2株单克隆抗体为IgG2b。将分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株的染色体计数，发现杂 交瘤细胞株染色体平均数为92条，而骨髓瘤细胞株染色体平均数仅为66条，从遗传 角度证明确实获得了杂交瘤细胞株；杂交瘤细胞腹水和细胞上清经ELISA检测，腹水 中3株杂交瘤分泌单抗的效价均可达l：105，而细胞上清的效价可达到1：104；单抗的 抗原结合位点分析表明，3株单抗的抗原结合位点基本一致；SDS结果显示，3 株单抗的重链分子量均在60ku以上，轻链分子量在30ku以上；在杂交瘤细胞的稳定 之问，说明该3株杂交瘤细胞分泌单抗的能力稳定，具有较好的遗传稳定性。 关键词：重组猪IFN—Q重组蛋白 单克隆抗体特性鉴定 Summary — Interferon a with is alpha(IFN-a)isglycoproteinhi曲bioactivity,whichproducedby inducedcells．It anti—viral forthesamekindsofanimal possessesBroad·spectrumactivity cells．At hasbeenconfirmedthat ahundred infectedto present，it nearly ofdiseasesare human ofwhichareviralinfectious animal，most through vaccinesand arenotavailable and for treatmentofthediseases． drugs prevention characteristicsofsome virusarestill Furthermore，biological pathogenic unclear．Among allIFN hasthemostanti--viral its in familymember,IFN-·a capacity,butapplication medicalscienceand scienceis limited．ThenceIFN-aresearch veterinary currently embodies monoclonal importantpracticalsignificance．Anti—IFN—aantibodydevelo