猪lipin和it基因的克隆与组织分布.pdf

王静 猪Lipin和FIT基因的克隆与组织分布 摘要 捅斐 脂肪诱导转录物(FIT)和Lipin都是与脂肪代谢有关的基因，FIT是对脂肪组装成脂滴 起关键作用的基因，一是内质网膜蛋白，参与脂类代谢的氧化作用。Lipin是一种关键的脂肪 调节酶，作为蛋白质在哺乳动物细胞中调节脂肪代谢。 为了研究Lipin和FIT蛋白的生物学功能，本试验以EST片段为基础，利用同源序列克 隆原理设计引物，对猪各种组织提取的总RNA进行RT-PCR，通过RT-PCR技术克隆得到 关生物学性质，并对其组织进行分布初探，试验分两个系列。 一、猪Lipin蛋白家族的克隆和组织分布 Lipinl基因包含一个完整的开放阅读框架(openreadingframe，ORF)为2-2686bp，全长为 2692bp，由894个氨基酸残基组成，其中酸性氨基酸为189个，碱性氨基酸为122个，分子量 人和大鼠的eDNA序列同源性分别为82．8％、85．O％、82．8％，预测的氨基酸序列与小鼠、人 和大鼠的同源性分别为88．8％、89．9％和88．7％。 氨基酸序列的同源性分别为87．4％、90．3％和87．4％。 “DIDGT’催化模序，Lipin3基因变体1与小鼠、人和大鼠的eDNA序列同源性分别为75．6％、 83．4％、78．6％，预测的氨基酸序列的同源性分别为75．9％、81．6％和77．4％。变体2全长为 人和大鼠的eDNA序列同源性分别为75．6％、83．2％、78．5％，预测的氨基酸序列的同源性分 别为76％、80．9％和77．4％。 组织分布结果显示：Lipinl在脾、肺、肾、膀胱、大脑、小脑、胃、空肠、肌肉和脂肪 等多种组织中都有分布，而Lipin2和Lipin3仅在脾、肺、回肠和肌肉中有分布。 二、猪FIT蛋白家族的克隆和组织分布 利用同源序列克隆原理设计克隆引物，对猪各种组织提取的总RNA进行RT-PCR，将PCR 王静 猪Lipin和FIT基因的克隆与组织分布 摘要 产物与pMDl92T载体连接后转化EcoLJMl09感受态细胞，筛选阳性克隆、测序，并进行序列 分析，克隆的猪FITI基因包含完整的开放阅读框架，长为13 10bp，ORF为400-1272bp，编码 290个氨基酸，其中酸性氨基酸为22个，碱性氨基酸为39个，分子量为32．17kDa，等电点为 10．47，信号肽为1-35aa，含有6个跨膜结构域。猪FITl的核酸序列与人、牛、大鼠和小鼠的 同源性分别为92。l％、93。2％、87．4％和88。1％，氨基酸序列的同源性分别为97．2％、96．6％、 94．8％和95．5％，为进一步研究FITI的生物学功能奠定了基础。 个氨基酸，其中酸性氨基酸为28个，碱性氨基酸为31个，分子量为29．64kDa，等电点为8．91， 信号肽为1-30aa，含有4个跨膜结构域。FIT2的核酸序列与小鼠、大鼠和人的同源性分别为 85．O％、85．7％和88．1％，氨基酸序列的同源性分别为87．4％、87．4％和92．0％，为进一步研究 FIT2的生物学功能奠定了基础。 组织分布结果显示：FITl主要在肌肉和脂肪组织有分布，其它组织分布量太低，而FIT2 在心、肝、脾、肾、大脑、小脑、空肠、回肠、甲状腺、肌肉和脂肪等组织都有分布。 FIT；克隆：序列分析；组织分布 关键词：猪；Lipim 2 王静 猪Lipin和FIT基因的克隆与组织分布 英文摘要 of andFITGene andTissuesDistribution Cloning PigLipin and Guo··yu Supervisor：Prof．LiHong··JiPro￡Yang Master