猪繁殖与呼吸综征病毒n、gp5蛋白的表达、纯化及结构分析.pdf

摘要 猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种以母猪繁殖障碍和 的结构蛋白。本研究通过构建PRRSV BJ一4株ORF5、ORF7不同的原核表达载体，应用不同的 纯化方法。获得高纯度的重组表达蛋白，通过对纯化蛋白的圆二色谱(cD)分析，绘制出GP5、 N蛋白的二级结构图，从结构生物学的角度分析了PRRSVN、GP5蛋白结构与功能的关系。 吸综合征病毒(PRRSV)PRRS pGEX一6P-N在E,coli BL21细胞中可溶性表达融和蛋白GST-N，经GST亲和层析获得重组蛋白 pET28a，得到重组表达载体pET28-N．转化E．coli BL21(DE3)细胞，’获得可溶性表达，表达量 占菌体蛋白的28％。经ProbandNi”亲和层析获得重组蛋白P28-N。 量分别为16％，32％，50％。进一步通过包涵体变性复性、分子筛凝胶层析、GST亲和层析获得 纯化的重组表达蛋白GST-dE、GST-dEM和P32．dEM。 结合生物信息学分析，绘制出GP5、N蛋白的二级结构图。对P28-N重组蛋白的CD分析表明， 的结构预测，绘制出PRRSVN蛋白的=级结构图。N蛋白二级结构中，Ⅱ螺旋由40个∞组成。形 正融合分子的结构；通过多种结构预测方法比较，确定共同保守域的二级结构；结合圆二色谱二 aa，其它为无规则蜷曲。 B链约56fla，p转角14 根据N、GP5的二级结构，从结构的角度分析了PRRSV GP5、N蛋白结构与其功能的关系。 N蛋白的二级结构与其参与病毒核衣壳的形成、NLS穿梭运转功能及其线性表位的形成等功能密 切相关，N蛋白3个Ⅱ螺旋区及6链对N蛋白农壳的结构形成起重要作用。通过对GP5二级结 构的分析，为PRRSVGP5的变异、免疫原性、GP5的诱变表位等功能的认识提供了依据。 关键词：PRRSV；N蛋白；GP5；二级结构；圆二色谱 Abstract Porcine and the causativeof reproductiverespiratorysyndromevirus(PRRSV)is PRRS。 agent whichcaused failureinSOWSand in membrance reproductive respiratory problems piglets．Glycosylated coded ofPRESV，a∞two ORF5，ORF7 structural protein(GP5),nucleocapsid(N)proteinby major of PRRSV．Inthis N andGP5 as proteins study,theprotein were afusion with expressed protein inE therecombinantofNandGP5 glutathione—S-tran