卵丘细胞和培养件对牛体外胚胎生产效率的影响.pdfVIP

摘要 vitro vitro 体外受精(in fertilization，rVF)技术是牛体外胚胎生产(inembryo production，IVEP)的关键环节之一，该技术应用于奶牛性控胚胎的生产和优良肉 牛品种的快速繁育有着巨大的商业前景。目前牛胚胎的体外生产技术已得到很大 提高，但是还存在着生产效率较低、培养体系不稳定、体外胚胎质量不高、移植 妊娠率较低等问题。本研究利用屠宰场大量的废弃黄牛卵巢，对影响牛IVF胚 胎生产效率的主要环节进行了系统的研究，旨在优化牛IVEP程序，建立起一套 高效的牛体外胚胎生产体系。研究结果如下：(1)体外成熟(invitro 卵)、部分脱除和全保留的处理，受精后发现三组间卵裂率分别为46．8％、77．7 ％和78．9％；囊胚率分别为7．7％、24．2％和25．6％；囊胚孵化率分别为12．5％、 62．5％和68．9％。裸卵受精卵裂率、囊胚率和囊胚孵化率均极显著低于有卵丘细 培养牛IVF胚胎，各组卵裂率分别为86．4％、80．5％和76．O％，差异不显著(JP 胚胎培养基础液，两组卵裂率分别为82．9％VS．79．1％；囊胚率分别为35．2％VS． 组稍高于SOF组。结果发现，CRl和SOF两种基础液都能支持牛体外受精胚胎 获得很好的发育能力，但CRI基础液的效果略好于SOF。(4)牛IVF胚胎培养 养的第0、2、3和5天开始培养液中添加5％FBS，牛IVF胚胎囊胚发育率分别 影响，第2天添加FBS组的囊胚率高于第0天添加组，但差异不显著(P0．05)。 第3天或第5天添加FBS与第0天或第2天添加组相比，显著提高了囊胚发育 育潜力更好。(6)在胚胎培养的第3天，培养液中添加不同浓度的FBS(5％、 高于20％血清组，厘差异不显著(P0．05)；囊胚孵化率分别为70．4％、68．3 ％和55．4％，20％血清组囊胚孵化率显著降低(P0．05)。结果显示，在胚胎培 来源的培养效果优于BSA，不添加蛋白质(PVA组)不利于胚胎的发育。(8) 胚胎培养液中分别添加0、l、10和100 ng，rnl的leptin，各组卵裂率无显著差异 时囊胚率显著高于100ng／ml组(PO．05)，其余各组间无显著差异；各组囊胚 宜。 综上所述，牛卵母细胞体外受精前全保留卵丘细胞，体外受精胚胎的基础培 牛体外胚胎生产效率最高。 关键词：牛，卵丘细胞，胚胎，体外受精，血清 Ⅱ Abstract bovinein BovineIVF isoneofthemost for technology importantprocedures this WastO effects vitro of embryoproduction(IVEP)．Theobjectivestudy investigate suchas of of and of factors cumulus medium,size many cells，type drops，BSA，FBS on of IVF tOestablishanreliableinvitro bovine leptindevelopment embryos，and to inwhichbovine