可删除标记基因达载体的构建.pdfVIP

ConstructionofexpressionvectorofexcisionMarkers ConstructionofexpressionvectorofexcisionMarkers CCoonnssttrruuccttiioonnooffeexxpprreessssiioonnvveeccttoorrooffeexxcciissiioonnMMaarrkkeerrss ADissertationSubmitted to ShiheziUniversity ShiheziUniversity SShhiihheezziiUUnniivveerrssiittyy InPartialFulfillmentoftheRequirements FortheDegreeof MasterofAgriculture MasterofAgriculture MMaasstteerrooffAAggrriiccuullttuurree By By BByy WangHewei WangHewei WWaannggHHeewweeii (ClinicalVeterinaryMedicine) (ClinicalVeterinaryMedicine) ((CClliinniiccaallVVeetteerriinnaarryyMMeeddiicciinnee)) DissertationSupervisor:Prof.ZhangYinguo AssociateProf.ZhouPing、WangLimin May,2013 课题来源：新疆生产建设兵团博士资金专项 2011BB0 2011BB0 项目编号BBB00 摘 要 摘 要 摘摘 要要 目的：Cre/loxP重组系统是应用最广阔，研究最多的特异性重组系统，为了消除 由非目的基因对转基因细胞和动物带来的影响，更好的研究转入基因的单一功 能，本实验利用Cre/loxP特异性重组系统构建可删除标记基因载体，构建的载体 是以可以产生特异性红色荧光的商业化载体DsRed2-1 为骨架，加入了LoxP 序 列，并加入了MCS序列，有利于目的基因的插入，同时也克隆了CMV启动子， 合成了TK-IRES 序列，为生产较为安全的转基因动物奠定了基础，为他人利用 这些基因序列构建不同用途的载体，满足不同的实验需要奠定了基础。 方法：(1)克隆CMV 启动子，人工合成了LoxP-MCS-LoxP 序列，先后连接到 DsRed2-1载体上构建真核表达载体上，命名为pCMV-Red-LoxP，人工合成Cre 重组酶序列，连接到 pTRE-tight 载体上，然后将 tight-Cre 片段连接到 pCMV-Red-LoxP 载体上，构建成疑似的pCMV-Tt-Cre-LoxP-Dsred 载体。(2)人 工 合 成 TK 基 因 序 列 ， 连 接 到 pCMV-Red-LoxP 载 体 上 ， 命 名 为 pCMV-Red-LoxP-TK，用该载体转染新疆细毛羊成纤维细胞，观察结果。(3)利用 限制性