多头带绦虫tm8基因的克隆与原核表达.pdfVIP

中文摘要 脑多头蚴病又称脑包虫病，是多头带绦虫(Taenia 多头蚴Coenurusce 枢神经系统的功能障碍的一种人畜共患寄生虫病。该病呈世界性分布，尤其以牧区较 为常见。脑包虫病的药物疗法效果不稳定；手术疗法效果虽好，但仅适用于脑表层的 包囊。随着人们对食品安全的关注和寄生虫耐药性的出现，免疫接种重新受到人们的 重视。早期进行疫苗研究的抗原均为天然抗原，虽然对脑包虫的免疫预防有一定的效 果；但足由于受抗原来源的限制，使其很难推广应用。在这种情况下，基因工程疫苗 成为一个不错的选择。 本研究根据已知的带科绦虫的18kDa抗原基因的序列设计一对特异性引物，对多 克隆到PMDl8-T载体上，序列测定结果显示本次实验首次扩增出了中国株多头带绦虫 的18kDa抗原基因，命名为Tml8。扩增的序列中包含完整的开放阅读框，编码由131 个氨基酸组成的蛋白质。软件分析表明多头带绦虫四川株Tml8与国外报道的多头带绦 虫土耳其株(序列号为EF672034)同源性为91．26％，氨基酸序列同源性为79．3905。 根据获得的基因序列设计一对表达引物，构建原核表达质粒，转化表达宿主菌 最佳条件为37℃、0．6mmol／LIPTG诱导8h，融合表达的Tml8蛋白分子量为39．4 kDa，并以不溶的包涵体形式存在于菌体中；免疫印迹表明该表达蛋白能与脑包虫病 患羊血清相识别。纯化的重组蛋白与弗氏完全佐剂(FCA)混合液免疫接种小鼠后，用 和IgG2a抗体显著升高。研究结果表明rTml8重组蛋白具有良好的免疫原性，可以 作为免疫保护性抗原用于脑包虫疫苗的研制。 关键词：多头带绦虫；Tml8基因；克隆；原核表达；免疫原性 英文摘要 and ofTml8ofTaenia Cloningprokaryoticexpressiongene muMcepsoncospheres WangYingwang(PreventiveVeterinaryMedicine) Directed Guangyou byprofessorYang of (Department ofVeterinaryMedicine，SichuanAgricultural Parasitology,College 1 University,Ya’all，Sichuan，6250 4) isakindofseriousfatal causedthe Abstr翟et：Coenurosis，which zoonoses，isby ofCoenurus inthecentral parasitism cerebralis，and nervousof and develops systemsheep other hasbeendocumentedinscatteredfoci theworld， ungulates．Coenurosis throughout in treatmentofCoenurosisis effect conservative，