牛白细胞介素2因克隆、表达及多克隆抗体的制备.pdfVIP

摘 要 摘要 牛白细胞介素2主要是由辅助性T淋巴细胞产生的一种淋巴因子，通过免疫网络调控机 体免疫功能，在机体免疫反应中起着极为重要的作用。因其具有免疫增强剂、抗肿瘤和抗感 染的特点是理想的免疫佐剂和免疫治疗剂。但正常情况下，机体产生的BoIL．2的量非常有限， 一定程度上限制了对BoIL．2的研究和应用。本实验主要应用重组DNA和基因表达技术，通 过RT-PCR方法克隆BoIL．2基因，并对其基因序列进行分析和表达，旨在为大量制备和生产 高效价廉的BoiL．2，为其生物学活性及应用研究奠定基础。 基因序列同源性为98．7％，氨基酸同源性为99．4％。 将测序正确的pMD．1 分别回收后T4连接酶进行连接，转化、提取重组质粒。通过双酶切及PCR鉴定阳性的重组 质粒进行序列测定后在大肠杆菌的表达，分子量约为23．49ku；表达产物主要分布在包涵体中。 Western 的活性，可知重组BoIL-2(rBoIL．2)对牛及山羊淋巴细胞有明显作用，对猪淋巴细胞作用不 明显。用镍离子亲和树脂对所得的BoIL。2重组蛋白进行纯化，并免疫新西兰兔成功制备兔抗 rBolL．2多克隆抗体，为下阶段的研究提供了重要的实验材料。 关键词：白细