瘤胃纤维降解菌eal-time pcr荧光定量方法的建立及其初步应用.pdfVIP

摘 要 对绵羊瘤胃主要的几株纤维降解菌如产琥珀酸拟杆菌Fibrobacter succinogenes，白色瘤胃球菌gumincoccus flavefaciens和瘤胃厌氧真菌的Real．TimePCR荧光定量方法进行研究，获得 如下结果： 1．DNA的提取采用珠磨一SDS／咖／PvP法。提取的瘤胃微生物总DNA在 用真细菌、古细菌和真菌16W18SrDNA的通用引物从纯化后瘤胃微生物总DNA 中成功扩增出目标条带，表明珠磨式机械破碎法能充分破碎包括细菌、真菌等在 内的各种瘤胃微生物，并满足后续实验的要求。 Green PCR 2．以16s／18SrDNA为靶序列，利用SYBRI荧光染料Real．time 法成功对Fibrobactersuccinogslles、gumincoccus flavefaciens和瘤胃厌氧真菌进行了定量检测，并构建了标准品，所建立的标 P．L体系。对具 准曲线斜率均在．3．0左右，有效检测灵敏度可达101水平拷贝／20