绵羊骨髓抗菌肽smap-29）在毕赤酵母中表达的研究.pdfVIP

摘 要 抗菌肽是广泛存在于自然界生物体中的多肽，是生物体先天免疫的重要组成 部分。因其具有抗菌活性强、广谱抗菌、热稳定性及不易产生耐药性等优点而广 受人们的关注。 Zanetti等 研究小组在绵羊的骨髓mRNA中发现的，具有两亲性Q一螺旋结构域，属于 cathel icidins家族，含29个氨基酸残基，有很强的抗细菌、真菌、中和内毒 素等生物学功能。 母(Pichia 基因片段。通过基因重组的方法将合成的基因克隆入pPIC3．5K载体中构建重组 建成功。将构建成功的载体电击转化至毕赤酵母受体菌GSll5中，经G418筛选 高拷贝转化子，并用删、MD板和PCR法筛选Mut+表型。对构建好的重组酵母表 果在诱导至第2天的细胞裂解液中检测到与预测的SMAP-29分子量相当，约为 mRNA， 发现表达期的酵母细胞中存在SMAP一29mRNA，而对照没有检出，表明SMAP-29 在毕赤酵母中存在表达。表达产物经凝胶过滤色谱处理后进行抑茵活性检