肿瘤基因治疗新略端粒酶核酶择时治疗肿瘤研究.pdf

肿瘤基因治疗新策略： 端粒酶核酶择时治疗肿瘤研究 摘要 目的： 为有效切割肿瘤细胞端粒酶RNA组分及逆转录酶组分 mRNA，抑制肿瘤细胞端粒酶活性，从而达到肿瘤基因治疗的目的。 开展该系列研究： 方法与结果： 1．针对端粒酶RNA组分模板区设计合成锤头状端粒酶核酶 酶RNA组分的体外切割效率，达60％左右。用脂质体介导法，将 酶活性降至对照细胞的11‰12．5％，细胞生长速度明显变慢，传 至19～20代时出现95％凋亡，裸鼠移植瘤注射pXJ“”。“oRZl4d后， 端粒酶活性下降69％，抑瘤率达62％。 2．设计并合成了针对端粒酶逆转录酶mRNA．2239的锤头状核酶 基因，构建了该核酶基因的体外转录和真核表达质粒。检测了该 核酶对端粒酶逆转录酶mRNA的体外切割效力。并将该核酶基因转 染至肿瘤细胞中，检测其对肿瘤细胞端粒酶活性和生物学性状的 影响。结果表明，该核酶在体外和细胞内均能有效切割端粒酶逆 转录酶mRNA；在细胞内能明显抑制端粒酶活性，使其降至对照 细胞的50％一25％。并使细胞生长变慢，倍增时间延长。 3．设计合成了针对端粒酶逆转录酶mRNA5’端区的锤头状核酶 hTERT一5’RZ基因，并将该基因重组入pcDNA3．1(十)，经体外转录