ptd对bt杀蛋白cry1ac的增效和克抗分子机理研究.pdf

摘要 苏云金芽孢杆菌(Bacillus 剂，在世界范围内得到广泛的应用。编码Bt杀虫蛋白的基冈也作为最主要的杀虫基因转入到了 多种重要的粮棉作物中，在害虫防治中起着巨大的作用，但目前害虫对Bt的抗药性已日趋严重。 小菜蛾Plutella 生抗性种群的害虫。 transduction 蛋白转导结构域(Protein domain，PTD)是一类能自动穿透细胞膜，并能作为载 体将其它生物大分子携带进入细胞膜内的一段富含精氨酸的多肽。本研究利用TAT(一种m) 作为载体携带生物大分子透过细胞膜的能力，在本实验室构建的TAT-CrylAc融合表达蛋白的基 础上，从融合杀虫蛋白对敏感、抗性小菜峨BBMV的亲和能力；融合杀虫蛋白与敏感、抗性小 菜蛾类钙粘蛋白(Cadherin．1ike 效和克抗机理。具体结果如下： 1．表达的六种融合杀虫蛋白对小菜蛾3龄幼虫进行毒力测定，结果表明：六种杀虫蛋白浸渍 叶片后对敏感和抗性小菜蛾均有杀虫活性，加汀肽的融合蛋白比未加w汀肽的融合蛋白的杀虫 具一定的增效作用，增效作用达显著水平。 2．对克隆的小菜蛾抗性品系和敏感品系的钙粘蛋白核苷酸进行分析，结果显示：钙粘蛋白核 品系，有10个氨基酸发生替换。 4．利用ELISA免疫检测方法间接测定了融合杀虫蛋白与小菜蛾中肠BBMV、融合杀虫蛋白与 TAT肽能够通过增加杀虫蛋白与小菜蛾中肠上皮细胞的亲和力而提高C叫1Ac的活性，达到克服小 菜蛾对CrylAc抗性的目的。 关键词：小菜蛾，CryIAc，钙粘蛋白，蛋白转导结构域(PTD)，杆状病毒表达系统，亲和性 Abstract The insecticidal Bacillus areof environmentallyfriendly crystalproteins producedby thuringiensis scientificinterestbecauseoftheir and awide of to insect great potency range pests．Because specificity oftheir specific toxinsoffertremendousbenefitsforinsect highly toxicity，Bt pest management．The selection showedthat couldalso toBt laboratory experiments toxins．So manypests adapt far， documentedcasesofresistancetoBtin of are limitedtooneinsect open—fieldpopulationspestsonly diamondback species，the moth(DBM，Plutellaxylostella)． Proteintransduction akindof domain(PTD)is has