一种利用红藻特性硫酸多糖进行乙醇转化的研究.pdf

一种利用红藻特征性硫酸多糖进行乙醇转化的研究 手两斐 目前，乙醇转化的原料主要局限于淀粉及纤维素类等中性多糖，不但争粮、 争地现象严重，而且原料预处理、糖化率提高及菌种对戊糖的利用等方面均进入 了技术瓶颈阶段，开发新型乙醇转化原料势在必行。海洋硫酸多糖作为一种聚阴 离子多糖，来源广泛、种类繁多、成本低廉，但在糖链的乙醇转化方面却未见报 道；因此，基于海洋硫酸多糖将成为乙醇转化的又一热点。本文以红藻特征性硫 酸多糖——K．卡拉胶为原料，经脱硫、专～‘降解酶系的定向水解及菌种发酵实现 其乙醇转化，研究了脱硫方法的筛选和比较、K．卡拉胶及K．脱硫卡拉胶的结构分 析、糖化参数的确定、糖化液组分分析及发酵工艺的优化，初步探索了K．卡拉 胶向乙醇转化的可行性。主要研究结果如下： K一卡拉胶脱硫方法的筛选和比较：将K一卡拉胶通过改进的甲醇解法及有机溶 剂法进行脱硫处理，以脱硫率、总糖得率、还原糖得率为指标，初步优化出最佳 的脱硫方法为甲醇解法。通过单因素试验及正交试验确定了甲醇解法的最佳脱硫 条件为：底物浓度0．5％，HCl．甲醇浓度1．0M，温度80℃，甲醇解时间20h； 在最适的甲醇解条件下，脱硫率达93％，总糖得率达90％，还原糖得率达18％。 优化的改进甲醇解法在脱硫率、总糖得率方面效果均优于有机溶剂法。 K一卡拉胶及K．脱硫卡拉胶的结构分析：采用红外光谱对K．卡拉胶及K．脱硫卡 拉胶进行结构分析，研究表明：同K．卡拉胶组分相比，K。脱硫卡拉胶原料的红外 吸收光谱图有明显的变化，总硫酸根的相对含量比值由2．2降至0．69，4．硫酸酯 的相对含量比值由1．34降至O．09，3,6一内醚半乳糖的相对含量比值变为零。这说 明经改进甲醇解处理后的K．脱硫卡拉胶脱硫效果较好，而且改进甲醇法对3,6内 醚键有一定的破坏作用。因此，改进的甲醇解脱硫方法实现了硫酸多糖向中性糖 的转化，为进一步的糖化水解奠定了良好的基础。 K．脱硫卡拉胶糖化参数的优化：将制备的K一脱硫卡拉胶经不同的酶制剂(果 胶酶、纤维二糖酶、纤维素酶、半纤维素酶、木瓜蛋白酶及卡拉胶酶)进行糖化 水解，以还原糖得率为指标，初步筛选出最佳的糖化酶制剂为果胶酶和纤维二糖 酶。通过单因素试验，初步优化出果胶酶和纤维二糖酶的最佳pH为4．0、反应 时间为72h。基于单因素实验，采用单一酶和复合酶分别对K一脱硫卡拉胶进行糖 化水解，初步得出复合酶的水解效果较好。并通过响应面分析确定K一脱硫卡拉胶 的最佳糖化参数为：果胶酶加酶量与纤维二糖酶加酶量比例为1．I：O．1(v／w：v／w)， 反应时间为96h，酶解温度为55．48℃，在此条件基础上进行糖化水解后，还原 糖产量达81．29％。l司时，通过对1(．脱硫卡拉胶及1(．卡拉胶进行水解对比，结果 表明K．脱硫卡拉胶的水解效果显著优于K．卡拉胶。因此，对K．脱硫卡拉胶糖化 水解为后期的发酵工艺研究奠定了基础。 K一脱硫卡拉胶糖化液的组分分析：采用葡聚糖凝胶柱层析对K．脱硫卡拉胶糖 化液进行分离纯化，初步将不同分子量的组分分开，得到四个组分，其中组分4 为主峰，分离效果较好。采用柱前衍生高效液相色谱(PMP—HPLC)测定了组分 4的单糖组成，结果表明：组分4主要由半乳糖构成，含量达65．15％。采用质谱 (MS)测定了组分4的单糖分子量，初步得出组分4的分子量为180Da，证明 K一脱硫卡拉胶糖化液可进一步经适宜的菌种发酵后应用于生物乙醇的制备。 K．脱硫卡拉胶糖化液发酵工艺的优化：采用不同的乙醇转化菌株对K-脱硫卡 拉胶糖化液进行发酵，以乙醇产率为指标，初步筛选出最佳的发酵菌种为S cerevisiae L一4。通过单因素试验，初步确定了发酵工艺的最佳培养条件：2％半乳 cerevisiae 糖种子液，底物糖浓度为2％，最佳的发酵液pH为5．O，接种量为8％，s L．4菌种发酵的最适温度为42℃，反应时问72h。同时，确定了无机盐对菌种 发酵的影响；硫酸铵添加量为3％o，磷酸盐添加比例为5％o，镁盐添加比例为4‰。 以1 mL发酵液， gK．卡拉胶原料，经以上的发酵条件得到乙醇产量达O．7∥100 相当于0．273 K-卡拉胶。