小菜蛾对氟虫双胺抗性风险评估及bi-pasa分子检测.pdf

符号说明 目 录 中文摘要………………………………………………………………………………………．I Abstract…………．…．．．．．．．．．．．．．．．．…．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．…．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．…．．．．……．．．．．．．．．……．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．IIl l引言………………………………………………………………………………………………………………………．1 1．1鱼尼丁受体(RyR)及鱼尼丁受体激活剂类杀虫剂的研究进展……………………～1 1．1．1鱼尼丁受体的发展史…………………………………………………………………一l 1．1．2鱼尼丁受体的结构……………………………………………………………………．．1 1．1．3鱼尼丁受体的类型……………………………………………………………………一2 1．1．4化合物对鱼尼丁受体功能的调节……………………………………………………。2 1．1．5作用于鱼尼丁受体杀虫剂的研究概况………………………………………………．．3 1．1．5．2氟虫双酰胺的理化性质………………………………………………………………3 1．1．5．3氟虫双酰胺的毒性……………………………………………………………………4 1．1．6鱼尼丁受体激活剂类杀虫剂的作用机制……………………………………………．．4 1．2小菜蛾的生物学及其抗药性研究进展…………………………………………………．4 1．2．1小菜蛾的生物学及危害………………………………………………………………一4 1．2．2小菜蛾的抗药性现状…………………………………………………………………～5 1．2．3小菜蛾的抗药性机理研究……………………………………………………………一6 1．3鱼尼丁受体基因突变频率检测技术……………………………………………………．7 1．3．1 Bi—PASA技术原理………………………………………………………………………7 1．3．2 Bi—PASA技术特点及应用………………………………………………………………8 1．4本研究的目的及意义……………………………………………………………………．9 2材料与方法………………………………………………………………………………．．10 2．1供试材料…………………………………………………………………………………10 2．1．1供试昆虫………………………………………………………………………………10 2．1．2供试药剂及化学试剂…………………………………………………………………．10 2．1．3主要分子试剂…………………………………………………………………………11 2．1．4主要仪器………………………………………………………………………………12 2．1．5试剂及培养基的配制…………………………………………………………………12 2．2试验方法…………………………………………………………………………………13 2．2．1小菜蛾的饲养…………………………………………………………………………13 2．2．2氟虫双酰胺对小菜蛾的毒力测定及抗性选育………………………………………14 2．2-3交互抗性的测定………………………………………………………………………14 2．2．4构建种群生命表的方法………………………………………………………………14 2．2．5抗性现实遗传力(h2)估算与抗性风险评估………………………………………．15 2-3 PCR及Bi．PASA等方法………………………………………………………………～l5 2．3．I小菜蛾RNA提取、逆转录及PCR扩增……………………………………………15 2．3．1．1小菜蛾RNA提取…………………………………………………………………．．15 2．3．1．2小菜蛾总RNA的检测……………………………………………………………一16 2．3．1．2．1小菜蛾总RNA纯度检测一分光光度法…………………………………………16 2．3．1．2．2小菜蛾总RNA完整性的鉴定一琼脂糖凝胶电泳………………………………16 2．3．1．3引物的设计…………………………………………………………………………．．16 7 2．3．1．4小菜蛾第一链eDNA合成…………