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单克隆抗体制备技术 2008年11月6日 杂交瘤技术的基本原理 HAT培养基的选择原理： A：氨基蝶呤(A)是叶酸拮抗剂，可阻断细胞利用正常途径合成DNA，细胞在含有氨基蝶呤的培养基中不能通过正常途径合成DNA。 B：瘤细胞是HGPRT酶阴性细胞，自身不能通过替代途径合成DNA而繁殖。 C：B细胞虽含有HGPRT，但不能在体外培养存活（只存活5~7d，且功能下降)。 D：融合细胞含有B细胞和瘤细胞，其中瘤细胞核利用B细胞的HGPRT酶进行旁路合成DNA而存活。 免疫程序与检测方法的建立 免疫程序 建立检测方法 检测免疫效果 免疫程序 免疫时是否采用佐剂和事先处理抗原，要依抗原性的强弱而定。一般来讲可溶性抗原用完全佐剂效果较好。抗原量同样与抗原强弱有关，以IgG为例，第一次为100?g，第二次为50?g，免疫途径第一次可经腹腔注射。对于细胞性抗原不用佐剂，每次腹腔注射1×l06-1×107。 检测方法的建立及免疫效果的评价 A：建立成熟的检测方法是关键，一般有以下几种方法： ELISA IPMA 免疫荧光 B：免疫效果的评价 一般于三免疫后一周，通过尾静脉采血检测抗体产生情况，一般以稀释1000倍仍为阳性判为免疫成功。 杂交瘤细胞株