小麦氮利用效率关基因tagdh的克隆与功能分析.pdfVIP

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2016-02-23 发布于贵州
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小麦氮利用效率关基因tagdh的克隆与功能分析.pdf

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小麦氮利用效率关基因tagdh的克隆与功能分析

符号说明 1吣Y帆2吣5眦8㈣7呲9删0蛐4帆目录中文摘要………………………………………………………………………………………．I Abstract．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．II 1前言………………………………………………………………………………………………………………………一l 1．1氮素的代谢………………………………………………………………………………．．1 1．1．1植物对氮素的吸收………………………………………………………………………1 1．1．2硝酸盐的还原与铵态氮的同化…………………………………………………………2 1．2氮代谢关键酶一谷氨酸脱氢酶…………………………………………………………．．3 1．2．1谷氨酸脱氢酶的结构及生理作用………………………………………………………3 1．2．2谷氨酸脱氢酶在光呼吸中的作用………………………………………………………4 1．2．3谷氨酸脱氢酶与碳氮代谢的关系………………………………………………………5 1．2．4谷氨酸脱氢酶在植物逆境中的作用……………………………………………………6 1．2．5谷氨酸脱氢酶基因在植物中的克隆……………………………………………………6 1．3小麦功能标记的开发……………………………………………………………………一7 1．3．1功能标记…………………………………………………………………………………7 1．3．2功能标记的开发及检测…………………………………………………………………9 1．4单倍型与关联分析………………………………………………………………………11 1．4．1单核苷酸多态性、连锁不平衡与单倍型……………………………………………．11 1．4．2关联分析的概念………………………………………………………………………．12 1．5研究的目的与意义………………………………………………………………………12 2材料与方法…………………………………………………………………………………14 2．1植物材料…………………………………………………………………………………14 2．2菌种和表达载体…………………………………………………………………………14 2．3GDH基因的克隆………………………………………………………………………．．14 2．3．1基因组DNA的提取…………………………………………………………………。14 2．3．2相关试剂的配制………………………………………………………………………．15 2．3．3植物mRNA的提取……………………………………………………………………15 2．3．4 mRNA反转录…………………………………………………………………………．16 2．3．5引物的设计……………………………………………………………………………．16 2．3．6 7 PCR扩增……………………………………………………………………………………………………．1 2．3．7琼脂糖凝胶电泳………………………………………………………………………．17 2．3．8 PCR产物的回收………………………………………………………………………．18 2．3．9PCR纯化产物的克隆…………………………………………………………………．19 2．3．10质粒DNA的提取……………………………………………………………………20 2．4TaGDHla功能标记的开发………………………………………………………………2l 2．4．1序列分析………………………………………………………………………………．21 2．4．2基于InDel开发功能标记……………………………………………………………．．21 2．4．3利用中国春缺失体进行标记定位……………………………………………………．21 2．4．4功能标记遗传作图……………………………………………………………………．22 3结果分析…………………………………………………………