柑橘衰退病毒的化与起源初步分析.pdfVIP

中文摘要 中文摘要 tristeza 柑橘衰退病(Tristeza)是由柑橘衰退病毒(Citrusvirus，CTV){l起的一种具有经济 重要性的病害．广泛分布于世界各柑橘产区，对全世界的柑橘产业造成了严重的威胁。CTV 非翻译医(URT)。CTV存在复杂的株系分化现象，不同的CTV分离株能引起包括茎陷点、 酸橙作砧小的甜橙和葡萄柚植株快速死亡在内的多种症状。随着品种结构调整，茎陷点型柑 橘衰退病为害日益加重。由于CTV在田问通过蚜虫传播，对其最有效的防治方法是应用弱毒 株系交义保护技术(MSCP)，而对其株系研究是应用该技术的基础。 本研究从我国野生柑橘资源丰富的地区收集CTV分离株，经直接组织点免疫(DTBIA) 和反转录．聚合酶链式反应(RT-PCR)检测，刚性样品嫁接保存丁二网室锦橙实生苗上。应用 物进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析，同时对cTV分离株的p25基冈进行单链构象多态 性(SSCP)分析，初步明确我国野生柑橘资源感染CTV及其分离株组群构成情况。同时，通 过对野生柑橘上的CTV分离株及国内栽培甜橙及柚上的强弱毒CTV代表分离株的部分基因片 分离株相应基阏片段进行序列比对，绘制基因系统发育进化树状分类l墨I进行遗传进化分析， 初步明确野生柑橘上的CTV分离株同国内外栽培品种上CTV分离株间的序列差异程度，为弱 毒株保护技术的应用和衰退病毒的进化及起源分析提供相关依据。 主要研究结果： 1 野生柑橘品种的收集j}DCTV检测 分别从我国云南、四川、重庆、广西、湖南、江西等野生柑橘主要分布地区收集到79个 野生柑橘样品，经中国农业科学院柑橘研究所国家果树种质(重庆)柑橘圃鉴定后进行DTBIA 和RT．PcR检测，筛选出共有11个野生柑橘样品携带CTV，带毒率为13．9％，说明野生柑橘存 在CTV的感染。 阿南大学博十学1青论文 2野生CTV分离株的组群构成分析 2．1 RFLP分析 I RFLP第1、 RFLP谱型，其中以第3组群为主，第l组群次之；有27．3％的样品表现出∥5膳№fI 3组群和第2、3组群混合谱型。 IRFLP第4组群，可能是具有潜在保护作用的弱毒株；另外一个 有一个样品含有p25／Hinf 样品为第6组群。 2．2 SSCP分析 混合组群的3个CTV分离株具有4条特征性谱带外，其余分离株均只有两条特征性谱带，说明 在野生状态F生存的柑橘植株主要受cTV株系的单一组群为害。并且SSCP分析与RFLP分析的 结果相一致。 3进化起源分析 将野生柑橘上的11个CTV分离株和国内栽培甜橙和柚上的强弱毒代表分离株位于基因组 5’的HEL，k17基因片段进行扩增和测序。 3．1同源性分析 将上述9个基因片段的序列进行同源性比对分析，结果表明11个野生CTV基因组的3’端的 序列同源性较高，保守性较强，5’端的序列变异较大。在分析的9个基冈片段中位于3’端的叩， 基闪的保守性最高，野生柑橘上11个CTV分离株问的核苷酸和氦墓酸序列的同源性分别为 92．1％～99．5％希194．8％～100％，同国内栽培品种上的4个代表分离株以及国外栽培妯种上的21 个代表株之间的核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为91．3％～99．5％和95．2％～100％， 酸和氨基酸序列同源性最低为77．0％和86．3％。t，7基因片段的核苷酸和氨基酸序列同源性最低 只有65．5％和63．2％。 中文摘要 3．2遗传进化分析 9个基因片段序列的遗传进化分析表明，碱基含鲑GCAT，以T结尾的密码子使圳频率较 高。四种碱基在密码子第一、二、三位的含量不同，野生柑橘样品和国内外栽培品种上的cTv 分离株P乃、p27、刀，基因片段核苷酸序列中碱基A的含鼙最高，c的含量最低；p：0、p13、p18， POL、HEL、k17基冈片段核苷酸序列中碱基T的含鼙最高，C的含量最低。低GC含鼍说明序列 的突变率较低。 其中叩5基因片段核苷酸序列中变异位点占总位点的25．2％，氨基酸序列中变异位点【吁总 位点的17．5％；k17基