放线菌hns22的分离、鉴定及抗烟草花叶病毒活性产物的研究.pdfVIP

放线菌HNS2-2的分离、鉴定 及抗烟草花叶病毒活性产物的研究 摘要 植物病毒病是农业生产中发生普遍、危害严重的一类病害，每年给农业生产 带来很大的经济损失．现有的化学药物对植物病毒病的防治效果不佳，且对生态 环境、人畜生存质量有负面影响。植物源农药因植物资源有限、成本高、效果不 稳定等因素，难以商品化生产。因此，筛选、开发微生物源抗植物病毒活性物质 是防治植物病毒的主要研究方向。 于不同自然生态环境中，可以产生多种抗生素及非抗生素类活性产物，应用于人 类细菌病、真菌病、寄生虫病、肿瘤甚至病毒病的防治。放线菌中以链霉菌合成 抗生素次生代谢产物的能力最强，放线菌产生的抗生素中有90％是以链霉菌作为生 产菌种生产的．现已从链霉菌中得到土霉素、金霉素，氯霉素、红霉素等氨基糖 苷类、大环内酯类，多烯类、聚醚类抗生素．但对于防治植物病害的抗生素，尤 其是抗植物病毒的活性物质，却很少报道。 本文从土壤放线菌的分离、抗TMV菌株的筛选、菌株的鉴定、摇瓶发酵条件 的优化以及活性物质追踪分析等方面进行了系统研究，结果如下： 1)为了提高土壤中放线菌的分离效率，解决放线菌分离培养中真菌、细菌污 染问题，采用多种分离培养基和不同浓度抑制剂，从土壤样品中选择性分离放线 菌，试验结果表明，土样于90C条件下加热处理lh，在10倍稀释的土壤悬浮液 菌数量多，且细菌、真菌数量少，最适于放线菌分离。采用此种方法从117份土 样中分离得到放线菌菌株413个。 2)采用摩擦接种法接种烟草花叶病毒(TMv)系统侵染寄主普通烟草K326、 枯斑寄主曼陀罗，反复筛选，得到具有抗TMV活性的放线菌菌株唧S2—2。 rDNA 3)通过对HNS2—2菌株进行培养性状、形态特征、生理生化特征、16S 序列的测定及其系统发育分析的研究，表明HNS2—2为一种链霉菌，与草绿色链霉 strainNRRL 菌的模式菌株S．herbaricolorB-3299T的序列同源性为100％，因 此归入草绿色链霉菌，16S 4)进行摇瓶发酵培养基筛选、发酵温度、初始pH、接种量、装液量、种龄、 发酵时间等条件优化，得出发酵培养基为10％大米粉、2．2％黄豆粉为主要成分，最 条件下进行摇瓶发酵培养。 5)在对新菌株HNS2-2抗病毒活性物质的研究中，通过对发酵液迸行加热酸 化预处理、蒸发浓缩、透析分离、乙酸乙酯萃取逐级分离和活性追踪分析，得知 HNS2-2活性物质为小分子脂溶性复合物。 关键词：链霉菌；烟草花叶病毒；抗病毒活性物；分离；筛选；发酵 H IsolationAntiviral SoreeninJ,．rid k=tivity Identifiv4tionofk=tino哪oete=HNS2-2 Abstraot Plantvirus is of diseaseonethemost diseasesof and important crops causesseriouseconomic losses．Chemicalarelesseffective pesticides incontrolof virusdiseaseandhave to plant negativeimpactsthe oflife for andlivestock。On