小麦蓝色胚乳相cdna序列的分离鉴定.pdf

摘 要 本研究以小麦蓝粒单体5f{加系为材料，构建了相关cDNAj丈库和抑制 差减文库，并分离鉴定了一些与小麦蓝色胚乳表达相关的特亓性cDNA序 列，其目的是阐明小麦蓝色胚乳性状表达的遗传基础和发现相关基因。 研究获得以下主要结果： 1利用蓝粒小麦未成熟种子mRNA构建了蓝粒相关cDNA文库，最终 获得的未扩增文库约含I2X106个克隆子；对部分文库扩增后获得的文库 109 滴度约为2x pfu／ml。 2．构建了小麦蓝色胚乳表达相关基因的抑制差减文库，文库约含10000 个克隆子，插入片段多集中在100—500bp之间，平均长度约300bp。 3筛选获得了16个阳性克隆子，序列分析发现： 中3涉及小麦醇溶蛋白基因序列、1个涉及小麦低分子量谷蛋白亚基，这 些基因在小麦种子中一般表达较强，假阳性的可能性较大；另外5个cDNA 序列可能分别涉及单氧化酶基因、丝氨酸蛋白酶抑制剂基因和与小麦籽粒 硬度相关的基因序列，以及2个功能未知的小麦、水稻DNA序列，它们 可能与蓝粒性状的表达有一定的相关性； 认为这些序列可能与小麦蓝色胚乳性状的表达有关，而且没有相关的研究 报道，可能涉及新的功能基因。 4．对4个候选eDNA序列的表达特异佳分析发现：与玉米P450单氧化 酶基因相关的cDNA序列3及功能未知的cDNA序列15在蓝白粒未成熟 种子间差异表达，在蓝粒未成熟种子中的表达明显增强，说明它们可能与 蓝粒性状的表达相关：功能未知的cDNA序列14、16在蓝粒未成熟种子 中特异性表达，可能代表了与蓝色胚乳表达高度相关的基因。 关键词：普通小麦，单体附加系，cDNA文库，抑制差减杂交，蓝粒 种子，胚乳 Abstract bl constructedthe librarieswere TwokindsofeDNA using ue-grained additionline：onewasaconventionalcDNA wheatmonosomic library，whiIe otherwasa subtractive the suppression blue relatedeDNA wereisolated．Theofthis endosperm sequences purpose the basisofblue wastounderstand in study genetic endospermdevelopment the andfurther related wheat explore genes， asfolIOW： Theresultscanbesummarized eDNA frombluewheatseeds 1．Theconventional were library constructed themethoddescribedSMARTeDNA following by library