增强番茄果实颜基因的精细定位及相关基因的差异表达.pdfVIP

摘 要 番茄果实颜色是重要的品质性状之一，利用野生番茄中增强果实颜色的基因对于果实颜色品 质改良具有重要意义。为此国内外研究者展开了广泛的研究，已从野生番茄中鉴定了54个与果 颜色的QTL。 本研究在前人研究工作的基础上，以TA517及其近等基因系为主要材料，对其中的2个增强 果实颜色的QTL进行了精细定位，并利用cDNA．AFLP方法研究了含有增强果实颜色QTL的材 料在果实不同发育阶段基因的差异性表达。目的在于：通过QTL精细定位获得与之紧密连锁的 分子标记，增强育种家操作QTL能力，并为Qrg的进一步克隆提供理论依据：通过基因差异性 表达鉴定和分离与果实颜色相关的基因，研究基因在果实不同发育阶段的表达，并初步探讨QTL 影响果实颜色的机制。主要结果如下： 1、进行了能否将潘那利番茄图谱上的分子标记应用到多毛番茄进行遗传分析，并将其转化 为易于操作的PCR标记以克服RFLP和COS标记的操作复杂、耗时长、需要放射性步骤和成本 一致的多态性，表明RFLP和COS标记可以转化为易于操作、效率高成本低的CAPS标记。 E38／M47-150、E38／M62-300、E41／M59-140和E41M160．180，通过连锁分析将8个标记定位于多 毛番茄第4染色体底端长度为50cM的片段内。 3、利用CAPS和AFLP标记构建了番茄第4染色体底端长50cld片段的精密分子遗传图谱， 该图谱由26个标记组成，其中包括新建立的11个CAPS标记和8个AFLP标记，是原有图谱上的 10个标记的2．6倍。图谱覆盖了番茄第4染色体底端长50cM的片段，两个标记之间的平均距离 1．92cM。该图谱将为该染色体片段内的质量基因定位、基因组比较研究和重要农艺性状QTL的精 细定位奠定基础。 4、对多毛番茄第4染色体底端长50cM片段内的2个增强果实颜色的QTL进行了精细定位， ecolC 标记CP57和CTl73之间，遗传距离为2．3cM。 5、cDNA-AFLP是研究番茄基因差异性表达较为理想的方法，利用该法检测到162个在果实 的膨大期、绿熟期、转色期和完全成熟期特异表达的TDF。利用在选择性扩增中相同的引物组合 对分子量大于180bp的90个TDF进行了再次扩增、纯化、序列测定和同源性比较分析。结果发 VIIl 酶基因、生长素生长促进子蛋白质、蛋白质磷酸酶和ACC4基因的同源性高。其余TDF和己知 功能基因的序列相比同源性较差，只有19．23个碱基与已克隆的基因序列一致。在含有增强果实 颜色QTL (和)ic014．2的番茄材料在果实发育各个阶段特异表达的TOF与类胡萝h素合成途径有关的酶的 基因有较高的同源性．但与果实颜色密切相关的类胡萝p素合成途径、乙烯代谢途径、富含亮氨 酸的蛋白质合成途径等高度相关．表明ecol4．j和icol4．2不属于类胡萝h素代谢途径有关的酶 的基因，可能属于调节和控制因子。 其效果等同于各个CAPS标记的多态性的叠加，具有重复性好、分析效率高、成本低等优点，可 广泛用于番茄及其它作物快速的遗传鉴定和分子育种中。 美键词：番茄，果实颜色、CAPS，Multi-CAPS，精细定位，eDNA-AFLP IX Abstract Fruitcolorisone charactersin the fruit ofthe importantquality tomato．Utilizinggenesincreasing colorfromwild is to fruitcolorofcultivatedtomatoes．Untilnow54 significant getmplasm improving inthe relatedtofruitcolorhavebeencharacterizedworld．And QTLs QTL-NILs(near