外来入侵烟粉虱种群动态、遗传分化及对噻虫嗪的抗性分子机理研究.pdf

摘 要 (Bemisiatabaci)、斑潜蝇(Liriomyzasativae)、美国白蛾(Hyphantria Kuschel)等11种外来有害生物，在我国造成的年经济损失就达574．3亿元人民币。 Dryzophilus 其中，B型烟粉虱是世界性重要害虫，也是近年来入侵我国的外来有害生物，自90年代中后期入 侵我国以来，在许多地区暴发危害，造成了严重经济损失，现己成为我国蔬菜、花卉和棉花等经 济作物上的主要害虫。本论文主要对B型烟粉虱的种群动态、遗传分化及其对噻虫螓抗药性的分 子机理等进行了研究。 2002—2004年对山西省烟粉虱的寄主植物范围和危害情况调查结果：山西省现有烟粉虱寄主 植物27科103种(变种)，其中葫芦科、十字花科、茄科和豆科等危害较为严重，且以晋南地区 受害最为严重，寄主种类较多。 通过对12种主要寄主植物上烟粉虱田间种群动态调查研究，得知不同寄主植物上烟粉虱种 群数量达到高峰的时间有所差别，波动的幅度也不一致。烟粉虱在12种寄主植物上的种群数量 大小比较依次为：油葵西葫芦)棉花大豆南瓜茄子丝瓜番茄辣椒黄瓜菜豆玉米，说明 烟粉虱对其寄主植物具有一定的自然选择性。另外，采用扩散系数(C一，Z两，对烟粉虱在棉花、 油葵和大豆三种作物田的空间分布型进行了初步分析，结果表明均为聚集分布型。 经反复实验，探索了一套简便、可行、纯度高、带型完整的多头和单头烟粉虱DNA基因组的 提取方法。该方法提取的DNA．适用于如AFLP等对模板纯度和质量要求较高的分子标记技术研究， 同时也适用于其它小型昆虫DNA的提取。 通过DNA模板浓度、Mg”浓度、dNTP用量以及其它反应参数等的摸索、调整，建立了一套完 善的烟粉虱AFLP分子标记技术体系。 采用AFLP分子标记体系，对同一地区不同寄主上烟粉虱种群的遗传分化研究结果表明：不 同寄主烟粉虱种群之间已经存在一定的遗传分化．但分化的程度比较小：同一寄主烟粉虱种群内 的遗传分化则很低。 采用AFLP分子标记体系，对来自美国、以色列、已基斯坦、澳大利亚、肯尼亚、西班牙和 中国等7个国家24个地区的27个烟粉虱种群进行了不同地理种群间遗传分化及系统发育地位研 究。结果表明：烟粉虱不同地理种群间存在着丰富的遗传多样性。聚类分析结果显示，中国的烟 粉虱种群可能存在多个来源，同时表明中国目前至少存在B型、Q型和非B／Q等4种生物型。 表明，同一地区烟粉虱种群内的遗传分化和杂合度均较低，说明B型烟粉虱在中国的发展历史较 短，还没有积累更多的遗传变异。另外，从测试结果看，几个种群的平均杂合度大小依次为：北 河南(HN—China)。该结果将在揭示烟粉虱的入侵路径方面起着一定作用。 用噻虫嗪对烟粉虱进行室内继代抗性汰选，并采用改进的琼脂保湿浸叶法进行生物测定，获 得了抗性倍数为39．96倍的抗性品系和相对敏感品系。 采用AF”分子标记技术，对噻虫嗪烟粉虱抗性品系的遗传分化进行了研究，在聚类树中首 先是抗性个体与敏感个体聚为两枝，然后雌、雄个体聚为两枝，说明抗性品系在DNA分子水平上 己存在明显分化。另外，利用E—AcT／M-cTG引物，分别在全部抗性个体中扩增出了敏感个体所没 有的特异性同一片段(150bp)。而在全部敏感个体中扩增出了抗性个体所没有的特异性同一片段 (316bp)，这两个片段可能作为烟粉虱噻虫嗪抗性品系和敏感品系的AFLP分子标记而在抗性监测 中得以应用。 应用RAPD分子标记技术，对噻虫嗪烟粉虱抗性品系的遗传分化进行了研究，得出了与AFLP 分析类似的结果。而且。实验中用H9随机引物在抗性品系的所有个体中扩增出了敏感品系所没有 的特异性同一片段(约200bp)，此片段也有可能作为噻虫嗪烟粉虱抗性品系的RAPD分子标记而 被用于抗性监测。 采用AFLP分子标记技术，对不同抗性水平烟粉虱种群的遗传分化研究结果表明，抗性品系 与敏感品系在DNA水平上已存在明显分化，而不同抗性水平烟粉虱种群的遗传结构也发生了变化， 但同一种群内的遗传基础基本相似。 通过设计兼并引物和使用RT—PCR以及PACE技术．从烟粉虱抗性品系和敏感品系中分别克隆 出了1个a亚基，命名为BtSa和BtR a。BtSⅡ基因全长为2，187bp，开放阅读框为1，605bp， 编码534个氨基酸，这些氨基酸包含了nAChR家族和n亚基的一些典型结构特征。该基因和其 它昆虫nAChRa亚基氨