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小麦遗传转化参般优化及其应用研究 博士生：武丽敏 指导教师：郑有良教授(四川农业大学) 王丕武教授(吉林农业大学) 摘 要 本文以中国舂性小麦新品种(系)为外植体，进行组织培养和遗传转化参数研究。 在此基础上，将含有bar耩因和GUS报告基因的质粒pDM803用基因枪法转化小麦， 获得可育的转基因小麦植株，从而建立了适于中囡春性小麦基因型的基因枪转化体系。 j：要研究结果如下： 1、本试验首次报道2，4，5-T和NAA对小麦愈伤组织培养反应的影响，特别是详细 比较了它们与小麦组织培养试验中广泛应用的生长调节物质2，4．D之fHJ的差异。在添 自：]2、4，5．T的培养基中，幼胚胚性愈伤组织诱导率和愈伤组织鲜重增加量均高f添加 2．4-D的 2．4．D和NAA的培养基，且2，4，5-T显著抑制外植体萌发率。在添加2mg／L MS基本培养基上，幼胚胚性愈伤组织诱导率高达33．50％；而成熟胚在添加4 mg／I．2．4一D 的N。培养基上反应最好。 2．小麦幼胚愈伤组织分化频率(62％．76．39％)高于成熟胚愈伤组织分化频率 (38．57％．47．76％)。对小麦愈伤组织进行干燥处理，适宜时间内可有效地提高外植体分 O．25在生根培 TDZ可明显提高芽分化频率。IBA0．5+NAA 分化频率影响显著，O．5mg／L 养中表现晟佳，且加入氯化胆碱和多效唑，幼苗根系生长旺盛、粗壮，有利r移栽。 3．首次探讨在培养基中添加AgN03对普通小麦幼胚愈伤组织培养的影响。在培养基 中添加适宜浓度硝酸银可显著提高胚性愈伤组织率和愈伤鲜重，且能降低愈伤组织褐化 率。基因型和硝酸银浓度间的互作效应显著地影响胚性愈伤组织诱导率和愈伤组织鲜重 增加指数。在小麦组织培养不同阶段，添加适宜浓度的硝酸银是十分必要的。 mg／L 4．抑菌试验结果表明，头孢霉素对小麦愈伤组织的毒性比羧苄青霉素大。100 头孢霉紊即可基本抑制农杆菌的生长，而羧苄青霉素浓度为250mg／L才可以抑制住农杆 菌的繁殖，且对小麦愈伤组织的生长影响不大，愈伤组织诱导率达84．7％。由于低浓度 羧苄青霉素在组织培养中会表现植物生长素效应，所以在农杆菌介导小麦遗传转化时， 羧苄青霉素最适浓度为500mg／L。试验还发现，小麦愈伤组织对卡那霉素存在天然抗性， 而对潮霉素和G418的反应比较敏感，后两者适台作小麦转化的筛选试剂，适宜筛选压为 25mg／L。 件对外源基因瞬间表达的影响。轰击压力、轰击距离、真空度、轰击次数和渗透条件 对中国春性小麦遗传转化均具有显著影响。根据试验结果建立了一套适宜于中国春性 小麦基因枪转化程序，使外源DNA能有效地转移到受体中，同时减少转化中对愈伤组 织的机械损伤。试验共获得429块川农16抗性愈伤组织，59株再生植株。经PAT活 性检测，获得13株抗除草剂或半抗性植株，PCR分析检测到其中6株具有bar基因阳 性预期片段，转化效率达1．40％。 6．以成熟种子为材料进行了Basta抗性梯度试验。随Basta浓度增加，小麦幼苗牛长 受到抑制，高度明显降低，黄化率显著增大。Basta浓度为9 mg／L的处理适宜，播种后 转基因株系的后代，统计bar基因在Tl代的遗传分离情况。Basta抗：感分离比例为3： l，征明Basta抗性在转基因后代植株中稳定遗传，符合孟德尔显性革基因遗传分离规律。 关键词：小麦，组织培养，遗传转化，bar基因，基因枪 of aⅡd Genefi