小麦麸皮多酚氧酶的纯化及其酶学特性的研究.pdfVIP

摘要 多酚氧化酶（polyphenol oxidase,PPO）是自然界中分布极广的一种 Cu 金属 蛋白酶，小麦籽粒当中的多酚氧化酶是造成面制食品褐变的主要因素，褐变不仅影 响面制食品的营养价值还会降低其经济价值和感官品质。目前国内外对蔬菜、水果 中PPO 的分离纯化及酶学特性的研究较多，对小麦中 PPO 的分离纯化却鲜有报道。 本实验以小麦品种安农 0823 麸皮为材料，通过酶液粗提取、硫酸铵分级盐析、 Macro-prep DEAE 柱层析、SephadexG-75 柱层析等方法对其中的多酚氧化酶进行了 纯化并对其酶学特性进行了研究，同时对提取、纯化过程中的工艺参数进行了探索 和优化。结果表明： 1）浸提法可以有效地提取小麦麸皮当中的PPO 酶蛋白。 2）适当的温度 （4℃-10℃）、振荡频率 （120r/min）、时长 （8h-12h）、浸提系统的 PH（PH 6）可有效的保护提取过程中多酚氧化酶的活性，减少酶活性的损失。 3）浸提系统添加 3％的交联聚乙烯吡咯烷酮 （PVPP）可有效的提高 PPO 提取液的酶 活力。 4）提取的 PPO 酶活性最适 PH 为 PH5,最适温度为 37℃。 5）硫酸铵分级盐析可有效的提高 PPO 酶蛋白纯化的效率。 6）经 Macro-prep DEAE 柱层析、SephadexG-75 柱层析后的 PPO 蛋白，经 SDS 电泳显示为单一条带，大小分别为77KDa、78KDa 和 67.5KDa。 关键词：麸皮 多酚氧化酶 纯化 电泳 I  Abstract  Polyphenol  oxidase  (PPO)  is  a  Cu  metalloproteinases  ,existing  widely  in  the  nature.polyphenol oxidase in wheat grain is the main factors causing flour food browning  which not only influences the nutritional value of food ,but also lows its economic value  and  sensory  quality.At present the researches  about purification  and characteristics  of  vegetables and fruit PPO are more, wheat PPO are rarely reported.  The purification  and  enzymology  character of  wheat  PPO  from  the wheat  cultivar  AnNong  0823  were researched  by  This  experiment  with  varieties  of  wheat  bran  for  material, through the enzyme fluid extraction,  ammonium  sulfate grading salting­out  ,  Macro­prep DEAE column chromatography, SephadexG ­ 75 column chromatography and  so  on.At the same time the process parameters were optimized in  the process  of  the  extraction and purification. Results showed that:  1) Latifah is an effective method to extract wheat bran PPO.  2)  Appropriate  temperature  (4℃­10℃ ),  oscillation  frequency  (120r/min),  duration  (8h­12h), soaking system PH (PH 6) can stop polyphenol oxidase activity