棉花抗枯萎病抗转化机理的初步研究.pdfVIP

棉花抗枯萎病抗性转化机理的初步研究 摘要 新陆早7号和新陆早16号棉花品种对棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum 3年、2年对枯萎病抗性有明显提高的材料为研究对象，运用液体培养棉苗孢子悬浮液浸根 接种的方法，针对接种后抗、感材料的病理学变化和差异表达的基因进行了研究，旨在从病 理学和分子生物学角度揭示感病棉花品种经过病圃加压定向筛选后抗性发生转化的机理。 1、通过对2种不伤根的棉花枯萎病接种方法，即全生育期的田间病圃鉴定法和液体培养 棉苗孢子悬浮液浸根法进行对比，结果表明，液体培养棉苗孢子悬浮液浸根法(接种浓度为 107个分生孢子·mL1)全周期只需要30天，通过这种方法，可以在较短时间内鉴定出棉花品 种对枯萎病菌的抗、感病性。对比不同浸根接种时间(10、20、30、40、50、60min)对结 果的影响，发现浸根接种40rain可加快发病，鉴定结果和田间病圃鉴定的结果基本一致。 2、通过电子显微镜和光学显微镜观察接种后抗、感材料根部组织的病理学变化，发现二 者在宏观和微观病理学方面均存在一定差异。在宏观病理学方面的差异表现为：感病品种接 种7天开始显症，25天严重发病，整个植株维管束变色；但抗病材料生长健康或只有轻微症 状，维管束变色部位只局限在子叶节以下。在细胞和组织病理学方面的差异为：侵入后前期， 抗病材料被侵入的细胞中有细胞壁加厚现象；侵入中期，病菌可通过表皮层侵入感病品种的 薄壁组织，却只能到达抗病材料的皮层组织中；侵入后期，抗病材料中出现了大量寄主细胞 的降解物质或分泌物将菌丝包围，阻止了病菌进一步扩展。抗病材料无论抗侵入还是抗扩展 的能力都比感病品种大大增强。 3、利用差异显示PCR技术对接种枯萎病菌前后的抗、感材料中差异表达的基因进行了 初步研究。结果显示，反转录获得cDNA第一链，用3个锚定引物和4个随机引物组合扩增 的DDRT-PCR产物，经测序胶电泳分离回收，二次扩增共得到约62个差异条带。进一步通 过反向Northern杂交验证，发现其中有8个是抗病诱导增强的阳性条带。经克隆、测序并进 行同源性比对分析，结果表明，除14．3外，其余差异基因条带都可以找到同源性较高的序列。 和96％；22．2与缺氮条件下松科植物cDNA的同源性为100％，推断其与植保素类物质的调 控和生成相关；13．10与陆地棉纤维的cDNA同源性为100％，1蛋白质序列比对发现它编码磷 酸氧化酶相关的维生素类物质，推断其参与抗病相关酶类的合成途径；6-3与棉花根茎部幼 老相关蛋白mRNA同源性为98％。揭示这些差异表达的基因在抗性转化中的作用还需进一步 克隆其全长cDNA以及对其功能进行深入研究。 关键词：棉花枯萎病，定向筛选，接种方法，病理学，差异表达基因 Abstract horder。to disclose the why cotton can susceptible becomeSO variety rcsistantio E聊D嗍 infew ，够姗佩咖oIllyyearsdirectionalselectionin by disease cotton plot，dipping seedl她 姗ts叫lturedin with liquidspore