玉米光周期敏感关基因zmtfl1的克隆及功能验证.pdfVIP

捅 要 光周期敏感性是热带、亚热带玉米种质在温带利用的一个主要障碍。因此，克隆和研究 玉米光周期敏感相关的基因并揭示光周期敏感的遗传特性和内在分子机制具有重要的理论 和实践意义。本研究以热带玉米自交系CML288和温带自交系黄早4为材料，利用同源克隆 的方法克隆了与拟南芥TFLl、水稻脚Z僦基因同源的玉米ZmTFLl基因。利用荧光定量 PCR技术，研究了不同光周期处理下ZmTFLl基因在光周期敏感自交系CML288和光周期钝感 的表达关系。构建了ZmTFLl基因的过量表达载体，通过农杆菌浸染花序法转化拟南芥，观 察了转化株的表型，分析了相关基因的表达情况，对ZmTFLl基因的功能和作用机制进行了 研究。主要研究结果如下： 该基因序列含有4个外显子和3个内含子，CDS序列中含有522bp完整的开放性阅读框，推 同源性。蛋白结构预测显示其含有保守的PEBP结构域，且具有TFLI亚家族蛋白独特的His88 和Aspl44残基，表明ZmTFLl基因属于玉米PEBP基因家族TFLI亚家族的成员。 茎尖和叶片中的表达规律，分析了ZmTFLl基因与ZCNS,说用和ZAPl基因在玉米开花转换 过程中的表达关系。结果表明，在长短日照处理条件下，ZmTFLl基因在叶片中仅有微弱的 表达量，但在茎尖中的表达量很高，且在玉米不同的发育时期呈现出高低不同的表达变化， 表明ZmTFLl基因主要在茎尖起作用。基因间的表达关系研究表明，ZmTFLl基因在从光周期 诱导期向花发育转换的过程中起抑制作用，而2珊基因起促进作用，当ZCN8基因的表达量 达到一定的阈值时，它与ZmTFLl基因竞争结合DLFI的能力增强，就会解除ZmTFLl基因对 花分生组织基因ZAPI的抑制作用，激活ZAPl大量表达，促进花分生组织的发育，完成开花 转换过程。 够，．J4，获得3株转基因植株，其中两株转基因后代与突变体相比，花期延迟了约11天，开 花时的叶片数增加了5片，另一转基因植株直到衰老也没有开花。所有的转化株均形成无限 花序结构，且叶片表面的毛状体密度加大，植株高度明显增加。基因表达模式研究显示，在 突变体矽盱．14植株中，刀基因较弱的表达量就能激活FD，促进花分生组织基因API的表达， 形成早花表型，而在转化株中，高量表达的刀基因才能解除ZmTFLl基因对脚基因的抑 制作用，促进开花转换。表明ZmTFLl基因能够抑制开花，且具有与拟南芥TFLl基因相似的 功能，是玉米中的TFLl-Ilke基因。 关键词t玉米光周期敏感；同源克隆；ZmTFLl基因；荧光定量PCR；拟南芥转基因 GeneRelatedto andCharacterizationofZmTFLl Cloning Maize in PhotoperiodSensitivity Yanhui Supervisor：Prof．Chen Master Lili Candidate：Chang contain ABSTRACTand abundant Tropicalsub—tropicalgermplasms hereitary could the of broaden variation，which germplasmmaize，whentheyplanted temperate in isthemainrestrictionofi