苎麻雄性不育的传机理及应用研究.pdf

苎麻雄性不育的遗传机理及应用研究 博士生：丁明忠 指导教师：潘光堂教授 摘 要 苎麻(Boehmeriamvea)，又称“中国草”，是我国特有的纤维作物。苎麻雄性不育 从上世纪60年代发现至今，己引起了苎麻育种工作者和相关研究者的高度重视。由 于对苎麻雄性不育的遗传机制尚不清楚，限制了在育种上利用。因此，确有必要进行 深入系统的研究，从而促进苎麻杂交优势的研究和应用。本文采用经典数量遗传、细 胞遗传研究方法和现代分子生物学技术手段，通过对苎麻雄性不育的遗传特点、生理 生化基础及细胞学特征、雄性不育相关基因的克隆、雄性不育分子标记的建立和杂种 优势的利用等方面的研究，对苎麻雄性不育的遗传机理有了较为全面的认识，为利用 苎麻雄性不育进行杂交育种奠定了理论基础，指明了合理的应用途径。获得的主要研 究结果如下： 1．苎麻雄性不育表型鉴定 通过对苎麻雄性不育及恢复系表型的比较观察，结果表明，相对于正常可育植株， 雄性不育主要表现为雌花发育正常，而雄蕾瘦小，不开裂，花药干瘪，内容物很少， 无花粉散出；12．KI染色无颜色变化，雌花开放时雄蕾逐渐枯萎脱落。 2．苎麻雄性不育的遗传分析 对雄性不育系C26为母本、恢复系B8为父本组配的六个杂交组合的后代植株不育 性状分离情况进行调查和分析，表明苎麻雄性不育系C26的育性受一对隐性核基因和 细胞质基因共同控制，属于细胞质一核基因互作不育类型，基因型为T(11r)。恢复 系B8的育性受一对杂合基因控制，且细胞质与C26不同，基因型为F(对)。 3．苎麻雄性不育物质代谢 I 通过对苎麻雄性不育系和恢复系代谢产物分析后发现，可溶性糖含量在相同的发 育阶段，不育系均高于其恢复系，这种差异在大蕾时期最大，不育系C26、C4分别是 其恢复系的1．91和2．59倍。淀粉含量随着花蕾发育，不育系无明显变化，而恢复系则 不断积累，中蕾时期恢复系B16含量比不育系C4高72．8％，大蕾时期恢复系B8比不育 系C26高79．6％。可溶性蛋白质含量随着花蕾发育，不育系和恢复系均逐渐下降，但 游离脯氨酸含量的变化，在不育系与恢复系F】花蕾中可育株含量远高于不育株。 4．苎麻雄性不育同工酶谱分析 析，POD电泳分析未发现雄性不育的特征谱带，但同工酶谱恢复系强于不育系，尤其 是迁移率为0．59的条带在各时期均表现如此。SOD电泳分析仅在功能叶中检测到雄性 不育系与恢复系在带的强弱上的差异，同样表现恢复系强于不育系，但在雄蕾发育的 各时期均无酶带显示。在功能叶、幼蕾、中蕾和大蕾时期，SOD和POD活性均表现恢 复系均强于不育系。 5．苎麻雄性不育发生时期分析 通过对苎麻雄性不育系和恢复系的石蜡切片分析，结果显示，雄性不育发生在从 造孢细胞到四分体形成的各个阶段，不同的雄性不育系发生不育的时期和败育的原因 有所不同。不育系C4主要败育原因为无孢原细胞分化，在发育早期即彻底败育。不 育系C26主要败育时期为减数分裂期，败育形式主要为绒毡层巨大化，向内挤压小 孢子母细胞，使其不能正常生长发育进入减数分裂，或到后期绒毡层逐渐解体，小孢 子母细胞没有进入减数分裂，最终解体。此外还观察到维管束急剧退化现象。 6．苎麻NAD7基因片段的克隆与分析 隆了NAD7的eDNA片段，其长度为969 bp，编码322个氨基酸。序列比对表明该 cDNA序列及推测的氨基酸序列与拟南芥、油菜有98％的同源性。聚类分析显示，苎 麻NAD7基因的进化在植物中处于很古老的地位。 7．苎麻品种(系)与亲本间的遗传关系 Ⅱ 关系进行了分析，结果表明，21条引物在8份材料中共扩增出86条带，平均每条引物 扩增4．1条带，其中多态性位点71个，各引物扩增出的位点数3～8个，平均可以检测到 3．4个多态性位点。聚类分析结果表明，供试品种与其母本遗传距离较远表现特有的 偏父本遗传现象。 8．苎麻雄性不育特有分子标记的建立 用ISSR弓I物U835筛选到1个雄性不育特有的分子标记，对该标记进行克隆测序表 明其长度为658bp，并将此标记转化成了稳定的SCAR标记。利用此标记，对强优势组 合川苎8号自交群体进行验证，