水稻和红麻雄性育相关基因ms5的克隆、表达及转基因研究.pdfVIP

水稻和红麻雄性不育相关基因MS5的克隆、表达及转基因研究 水稻和红麻雄性不育相关基因MS5的克隆、表达及转基因研究 摘要 MS5(male 芥发现，且是一个育性相关的基因，MS5突变会导致雄性不育。相关研究显示，它在 调控细胞周期活动及在发育的花药细胞的减数分裂过程中起着关键作用。MS5突变体 由于在第二次减数分裂后出现了一次额外的分裂，而染色体没有复制，结果导致染色 体异常，出现多分体。其编码的蛋白产物类似小鼠联会复合体蛋I兰tSCPl，遗传分析 et 显示它是一个细胞核隐性孢子突变体(Chaudhurya1．，1994)。MS5基因属于一个植物 界中高度保守的小的多基因家族的成员。 蛋白质。在所鉴定的差异蛋白中，将No．326蛋白与水稻蛋白质数库进行比对，鉴定 研究基于从李刚研究结果，再次通过搜索比对各核酸及蛋白数据库，从水稻基因组序 库里有4个MS5同源基因，其功能未被注释。本研究将挑出来3个基因分别命名为 默及超量表达来研究这3个基因的功能，同时我们还克隆了红麻的MS5基因，并也 作了序列分析及在水稻中超量表达，为了解决基因工程创造细胞核雄性不育系的保持 问题，我们还对烟草刷硎进行功能研究，通过对水稻与红麻MS5基因及烟草 EPSPSl的功能研究，得出如下结果： 水稻和红麻雄性不育相关基因MS5的克隆、表达及转基因研究 结果表明以上OsMs5一，，OsMs5．2，OsMs5．3蛋白是MS5基因的同源基因。 料用农杆菌介导法转化水稻，分别获得转基因的阳性植株。对干扰表达转基因植株T1 代以印珊基因片段为探针进行Southem分析证明，获得了转基因阳性植株。对3个基 因的RNAi干扰转基因水稻后代进行形态及光学显微镜和扫描电镜观察，结果显示，TO 代的转基因植株表现不同程度的不育。转基因植株的花粉也不同于野生型植株花粉。 3、构建水稻OsMs5．，、OsMs5．2和OsMs5—33个基因带GFP标记基因的超量表达 载体，并通过农杆菌介导法转化水稻。并以粳稻中花11为受体材料，农杆菌介导法转 因进行亚细胞定位预测，用3个带GFP的转基因植株的幼苗根尖与愈伤组织压片置于 荧光显微下观察绿色荧光蛋白GFP的表达。转基因植株能观察到被蓝光激发出耀眼的 绿色荧光。 canabius 4、为了研究臃5同源基因在红麻(HibiscusL．)花药中的转录特征，以 7 7端cDNA序列，采用3RACE和 不育系L23A为试材，基于已知的红麻MS5基因5 RT-PCR技术对该基因全长cDNA序列进行了克隆。序列比对分析结果表明，红麻花药 组织中同时存在MS5基因2种不同的转录本，其长度分别为972 bp,l：11105bp，依次命 为858 kD，理论等 bp，预测编码的蛋白质含有285个氨基酸残基，相对分子量为32．4 电点为7．62。两者57端前972 7端的非编码区(UTR)长度有 bp序列完全一致，但3 所不同，HcMs5一p在第972 bp以后比HcMs5．Q多出133bp的序列，具有选择性转录终 止的特征。这种转录终止信号的可选择性可能与该基因转录后水平的调控有关。 基因在不育系和保持系中，在各个组织的表达没有差异，其中无论是不育系和保持系， MS5基因在根、花瓣及双核期花药有表达，在茎，叶和单核期花药，MS5基因的表 达量极低。但据李刚(2009)的研究，红麻该基因在蛋白水平上的表达量，在不育系 和保持系之间差异显著。由此推测可能与该基因转录后水平的调控有关。对红麻 HeMs5基因进行亚细胞定位预测，对GFP报告基因的转基因植株的幼苗根尖与