重寄生真菌盾壳降解草酸毒素及其引起的生防效应研究.pdf

摘 要 sclerotiorum(1db．)deBary]弓]起的油莱菌核病是一种世界 由核盘菌[Sclerotinia minitans)是核盘菌的一种具有 性分布的重要病害。重寄生真菌盾壳霉(Coniothyrium 广阔应用前景的生防菌。前人对盾壳霉防治核盘菌的机制和防病潜力已进行了深入 研究。这些机制主要侧重于盾壳霉对核盘菌的重寄生作用，竞争作用和抗真菌作用， 而对其降解核盘菌产生的草酸毒素及其产生的一系列生防效应则未见报道。 草酸(Oxalicacid，OA)是核盘菌产生的一种毒素，在核盘菌的致病过程中起着决 定因子的作用。盾壳霉可以寄生核盘菌的菌落以及核盘菌引起的病斑，可见盾壳霉 可以抵抗一定浓度的草酸。这种抗性的本质是什么?本研究从盾壳霉降解草酸的角 度出发，对盾壳霉降解草酸的能力和影响因子，以及由此产生的生防效应进行了研 究，旨在发掘盾壳霉防治核盘菌的新因子，以及增强盾壳霉防治油菜菌核病的效果 及稳定性。取得了如下研究结果： 首先，对盾壳霉降解草酸的能力进行了定量分析。结果表明：在含有0．8—32 液中的草酸含量下降85．9％一91．7％。这些盾壳霉培养物滤液的pH值从酸性水平(pH 7．7～8．6)。此外，从这些盾壳霉培养物滤液中还检 2．9—6．3)升高至弱碱性水平(pH 测出氨。产生氨可能是引起培养液pH值升高的另一个原因。而当mPDB中的草酸 浓度达到40和80mmol／L时，盾壳霉不能生长，培养液中的草酸含量没有发生明显 分别测定培养液和盾壳霉菌丝中的草酸含量，结果表明：培养液中草酸含量下降 88．0％，菌丝提取物中没有检测到草酸的存在。由此证明盾壳霉具有降解草酸的能 力。将油菜幼苗的根浸泡在盾壳霉培养物滤液中，测定其中的毒性。结果表明：盾 毒性显著降低，进一步证实盾壳霉具有解除草酸毒害作用的能力。 进一步定量分析表明：盾壳霉降解草酸与盾壳霉菌丝有关。其证据包括：(1) 盾壳霉培养物(mPDB+16mmol／L (8mmol／L)没有降解作用，这说明滤液中不存在降解草酸的活性物质或活性物质 的含量很低；(2)在盾壳霉培养物(mPDB+16mmol／LOA,200C，9d)中继续添加 结果表明：补充营养物质处理的草酸降解较不加营养物质处理明显提前。这说明盾 壳霉菌丝生长与降解草酸是同步进行的。从盾壳霉菌丝中检测到草酸脱羧酶活性。 其次，对影响盾壳霉降解草酸的因子进行了研究。结果表明：酸性环境对盾壳 培养液中生长后对草酸根离子的降解率低于5％。在含草酸钠或草酸铵的培养液中 液中生长后，对草酸根离子的降解率上升至14．1％(草酸钠处理)或36．1％(草酸 铵处理)。在含草酸钠或草酸铵的培养液中添加盐酸(0．2％，v／v)后，培养液的pH 值下降至2．8—2．9。盾壳霉在这两种培养液中生长后，对草酸根离子的降解率上升至 7．0时，盾壳霉生长后降解草酸 节含草酸(8、16、24、32mmol／L)的mPDB至pH 的能力显著降低。 影响盾壳霉降解草酸效率的另一个因子是草酸浓度。在草酸浓度为 时，盾壳霉不能生长，因而不能降解草酸。 比较了两个培养特性(色素产生、双链RNA有无和液体产孢)差别较大的盾 壳霉菌株(Chy．1和ZS．1)降解草酸的能力。结果表明：这两个盾壳霉菌株降解草 酸的能力没有显著差异。 以查比培养液为基础培养基研究了5种碳源(葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖、 可溶性淀粉)和4种氮源(硝酸钾、硝酸铵、丙氨酸、谷氨酸)对盾壳霉降解草酸 的影响。结果表明：供试5种碳源和3种氮源(硝酸钾、丙氨酸和谷氨酸)均有利 于盾壳霉菌丝生长，因而降解草酸的效率较高(98％)。而硝酸铵不利于盾壳霉菌 丝生长，因而草酸降解效率较低(46．1％)。在核盘菌菌核提取物或菌丝提取物中添 培养液中的草酸全部被盾壳霉降解。 2 第三，研究了盾壳霉降解草酸对其产生重寄生相关的胞外酶(B．1，3．葡聚糖酶、 几丁质酶和蛋白酶)的影响、对这些胞外酶活性的影响以及对产生抗真菌物质的影 响。结果表明：盾壳霉降解草酸后，引起环境pH升高，有利于盾壳霉产生这三种 重寄生相关酶，并