虾（penaes vannamei）过敏原免疫活性的研究.pdf

虾(Penaeus Vannamei)过_敏原免疫活性的研究 摘 要 虾是人类最优质动物蛋白的来源之一，也是八大类容易引起过敏的食物之 一。随着国际贸易的发展，其在食品中的应用越来越广泛，食用虾引起过敏的潜 在危害更值得重视。本论文主要从虾过敏原蛋白的分离纯化、抗体的制备、免疫 检测、不同因子对其免疫活性的影响以及虾过敏的诊断等方面进行研究，得到如 下结论。 1．不同患者对虾中过敏原蛋白的识别不同，试验共识别到8个条带，其中 识别率最高的是分子量为36kD的原肌球蛋白，超过80％的患者血清IgE能够与 22kD的蛋白也都有识别。对不同品种的虾的免疫识别发现，虽然虾抽提物的蛋 白组分稍有差别，但主要过敏原均为分子量为36kD的原肌球蛋白，其免疫活性 没有明显的差别。 2．建立了虾过敏原蛋白活性检测的Dot．ELISA技术体系：利用纯化的虾过 敏原蛋白作为抗原分别获得鼠源和兔源的效价为160，000和80，000的抗体。在实 验中，本论文首次采用S180细胞刺激经过3次加强免疫的小鼠产生腹水，成功 的获得了效价为40，000的虾过敏原蛋白抗体，经过纯化后的抗体效价提高2倍 以上，且对虾过敏原蛋白具有特异性。 3．以获得的鼠源抗体为一抗，建立了间接竞争酶联免疫检测虾过敏原蛋白 为3．4％～9．1％，板间变异系数在12．9％～19．6％，达到了国际同类产品的水平。 4．以鼠源抗体为捕获抗体，胶体金标记的兔源抗体为检测抗体，制备了虾 过敏原蛋白检测的免疫渗滤试剂盒，检测限达到250n∥ml，检测时间在15mm 之内，达到了快速、简便、特异性的要求，但仍需进一步提高灵敏度。 5．本试验首次采用超声波处理虾过敏原蛋白，结果表明，在一定的条件下， 超声波能够降低虾过敏原蛋白的免疫活性。在O℃的条件下，超声波处理无论对 于虾抽提物还是虾肉都没有明显的影响。但在50℃条件下，超声波处理虾抽提 物的IC50值比未经处理的增大了10倍。而超声波处理的虾肉其过敏原蛋白的IC50 值更是从0．7I_tg／mL增加到11I．tg／mL，这说明在50 4C条件下超声波处理能够降低 虾过敏原蛋白的免疫活性，是一种有效降低虾过敏原蛋白免疫活性的方法。当然 这种结果还需要进一步的临床实验来证实。 6．辐照可以导致虾过敏原蛋白免疫活性的变化，当辐照剂量低于10kGv时， 处理的虾抽提物和虾肉的免疫活性有稍微增加；当辐照剂量大于10kGy时，虾 过敏原蛋白的免疫活性下降。辐照和加热联合作用可以显著降低虾过敏原蛋白的 免疫活性，10kGy辐照后，在沸水中加热5min，其Ic50值是未经处理的抽提物 的20—30倍，延长加热时间不能够继续使其免疫活性有明显的下降。 7．利用羊抗人IgE抗体为捕获抗体，以金标虾过敏原蛋白作为检测试剂， 建立了诊断虾过敏的免疫渗滤试剂盒，该试剂盒的特异性，重复性好，与商业化 的IVT702食物过敏检测试剂盒检测结果符合率为87．5％，仍有待进一步的完善。 关键词：虾，过敏原，检测，加工，诊断 II onthe of aI Study lmmunoreactivityshrimpIergen Abstract isoneofthebestanimal for isalsooneofthe kinds Shrimp proteinshuman；it eight offoodsthat causes the ofworld frequentlyallergy．Asdevelopment trade，shrimp wasusedmoreandmore inall of