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蝉蜕诱导球孢白僵菌产孢相关蛋白质差异表达分析 摘要 球孢白僵菌是一种广谱性虫生菌，具有主动感染寄主、能形成循环侵染和寄主难以产 生抗性等优点，正得到越来越多的关注，但存在击倒害虫时间长和防效不稳定等缺点，限 制了它的进一步应用。为了改变这一局面，各国科学家纷纷致力于球孢白僵菌致病分子机 理和遗传学研究，力图从基因水平揭示致病机理，通过基因工程技术提高菌株毒力。关于 球孢白僵菌致病分子机理的研究大多从毒素、致病基因等方面进行研究，很少从蛋白质组 学方向进行分析，本研究采用蝉蜕诱导球孢白僵菌，分析相关蛋白质差异表达，试图找到 毒力相关蛋白。 本研究建立了球孢白僵菌双向凝胶电泳技术方法：通过三氯乙酸／丙酮法提取球孢白 僵菌总蛋白质，能有效去除其中的白僵菌菌体多糖等杂质；采用Model680酶标仪按 M 8．3， Tris．HCl 质量较好。进行双向电泳时，将获得的蛋白质用硫脲尿素裂解液(0．5 pH mM mM P-40，20 PMSF)处理，摸 2％(v／v)Nonidet MgCl2，2％(v／v)p—mercaptoethanol，1 索出适合蛋白质样品通过再水化进入IPG干胶条内的条件，采用了50V／tb时聚焦，从电 泳图谱可以看出低电压较长时间电泳可以更有效的分离蛋白质；第二向SDS—PAGE电泳， 我们通过有效手段，避免凝胶发生扭曲现象；凝胶染色我们采用银染法，电泳条带清晰、 分离效果好、灵敏度高、不对质谱鉴定产生干扰。 达分析，有38个蛋白质表达量发生2倍以上改变，其中18个蛋白质表达量上调，20个 蛋白质表达量下调，2、8、9号为特异表达下调蛋白，22号为特异表达上调蛋白，这说明 在蝉蜕诱导球孢白僵菌的过程中，表达调控体系发生了复杂的变化，一些基因被关闭，一 点为产孢相关蛋白，为上调蛋白，与球孢白僵菌产孢过程相关，推测它在孢子形成过程中 的有丝分裂和减数分裂时期起作用；19和39号为尿嘧啶DNA糖基酶，为上调蛋白，与 DNA复制、结合和修复有关，推测与孢子形成也有相关性；还有其它蛋白质得到鉴定， 其中有DNA复制结合修复、能量代谢、转录调控蛋白质、蛋白质结构域等，推测其中一 些蛋白质在孢子产生形成过程中可能起到直接或间接作用。 通过对蚕蜕诱导表达的蛋白质分析，本研究获得了与球孢白僵菌毒力相关的蛋白数 据，为蛋白水平阐述致病机理提供理论依据。 关键词：球孢白僵菌，诱导，产孢，双向凝胶电泳，蛋白质组学 ofdifferential ofBeauveria expressed protein Analysis sporulation inducedcicadaexuviae by ABSTRACT Beauveriabassianais withothermicrobial Broad-SpectrumEntomopathogenicFungi，Compared infect of Callinvadehost carl pest pathogensinsect,entomopathogenicfungi actively,and Call host to