纤维素酶产生菌抗阻遏选育及其产酶条件优化.pdf

摘要 摘 要 纤维素酶是一种多组分复合酶系，一般由内切．p．1，4．葡聚糖苷酶、外切 ．p．1，4．葡聚糖苷酶和B．1，4．葡萄糖苷酶三种组分构成。纤维素酶自被发现以来就 受到众多学者的青睐，主要是纤维素酶具有非常广泛的应用领域，如食品工业、 纺织工业、畜牧业、能源等，但生产成本高限制了纤维素酶的工业化进程。提 高纤维素酶产生菌的产酶能力和优化生产菌的产酶条件是提高酶产量、降低酶 成本的重要途径。 本文从自然界筛选产酶能力较高的野生菌，通过紫外、微波诱变结合阻遏 剂筛选对其进行抗阻遏选育，获得抗阻遏效能和发酵产酶能力提高的变异菌株， 利用响应面法对变异菌株的发酵条件进行优化，探讨了纤维素酶的部分酶学性 质。本文的主要工作内容和研究结果如下： (1)从沂蒙山区的灌木枯枝、腐土中采样，用羧甲基纤维素刚果红培养基 初筛，然后通过摇瓶发酵测定各菌株的酶活进行复筛，筛选出一株CMCA和 FPA相对较高的菌株，通过菌落形态、菌丝和孢子显微形态观察，依据《真菌 viride 鉴定手册》和《普通真菌学》等书籍的参考，将其初步鉴定为绿色木霉(Z PersexFxNS90)。 (2)分别考察了不同浓度阻遏剂甘油、纤维二糖、葡萄糖对绿色木霉生长 和产酶的影响，结果表明：对菌体生长，在4％浓度范围内，甘油、葡萄糖、 纤维二糖的浓度越高，菌体量也越大。对发酵产酶，当甘油在O．4％时能促进酶 的生产，而在2％时阻遏酶的分泌；纤维二糖对酶的发酵没有呈现明显的影响； 葡萄糖除O．4％外，其他浓度均对酶的生产有阻遏作用。经紫外照射90s，微波 辐射60s，选育到的突变株相对于原始菌株在相同浓度的阻遏剂下其CMCA和 FPA分别提高了41％和44．95％。突变株在生长过程中，菌落由黄色逐渐变为绿 色，呈现黄色孢子。 (3)采用响应面分析法优化绿色木霉变异菌株Uw二ⅡI的发酵产酶条件。 根据模型预测和实验验证，得到绿色木霉变异菌株UW．IⅡ产酶的响应面模型优 化发酵条件为微晶纤维素、麸皮和发酵时间分别为6．1 h，且 g／L、8．5g／L和96 U／mL。 CMC酶活达362．523 (4)研究了绿色木霉纤维素酶的部分酶学性质，包括最适温度、最适pH、 II 摘要 温度稳定性、pH稳定性以及甘油、葡萄糖、纤维二糖的影响等，结果显示：绿 色木霉纤维素酶的最适反应温度是50C，最适pH是5．0左右，酶具有相对较 好的温度稳定性和pH稳定性；纤维二糖在低添加量下对绿色木霉纤维素酶活 具有促进作用，葡萄糖对纤维素酶的抑制作用明显。 关键词：纤维素酶：绿色木霉；抗阻遏选育；酶学性质 ⅡI Abstract ABSTRACT Cellulaseisa isgenerallycomposed enzymecomplex，which multi．component of and is endo．p．1，4．glucanase，exo-p-1，4一glucanase ithasa wide of interested becausevery rangeapplications， scholars，mainly bymany