疫霉菌诱导的南ssh文库构建及表达序列标签分析.pdfVIP

摘要 摘 要 南瓜是葫芦科南瓜属一年生经济作物，其经济价值和药用价值均十分显著。随着对外 贸易的发展和南瓜籽及南瓜系列产品的开发，南瓜种植面积不断扩大，为农民带来了巨大 的经济效益。在有的年份和地块由于南瓜疫病的流行，籽用南瓜的产区受瘦病危害，引起 的死秧、烂瓜现象严重，重症年份部分地区甚至绝产，因此，疫病己成为南瓜生产的限制 因子，生产上迫切需要解决疫病危害的问题。然而，只有深入研究南瓜的抗病机制以及南 瓜与病原菌的互作关系，才能从根本上解决这个问题。本研究运用抑制差减杂交(SSH)技 术构建eDNA文库，应用EST技术并结合生物信息学技术，通过对南瓜抗疫病相关基因的表 达分析，从基冈水平来研究南瓜抗病机制。为今后的南瓜抗疫病遗传育种奠定理论基础。 文库，通过反向Northern杂交、质粒舣酶切、菌液PCR进行初步筛选后，对其中60个阳 EST找不剑任何同源序列，推测可能是一类新的基因，或变异度较高的cDNA非编码区。 与52条EST同源的推测蛋白质序列来自黄瓜、西瓜、拟南芥、水稻、甘蓝型油菜、甘蓝、 马铃薯、葡萄、玉米、烟草、高粱、甜菜、菜豆等多个物种。 通过对获得的EST序列进行分析，推测钙凋蛋白激酶、茉莉酸等信号传导系统可能参 与了南瓜抗疫病防卫反应过程中的信号传导，但各信号传导间的相互作用机制还不清楚。 抗病相关转录因子包括锌指蛋白、MYC转录冈子、G．box结合蛋白，它们可能在南瓜抗病 防卫反应基因的表达凋控中起到重要作用。 在本研究中，有两条EST与马铃薯和拟南芥的抗病基冈类似物有部分同源性，应该是 参与南瓜抗疫病反戍的重要基冈。另外在所获得的EST中存在部分碓生物胁迫诱导蛋白如 热休克蛋白、盐诱导蛋白等。说明生物机体对外界的胁迫反应，存在某种协同机制。 在获得的EST中还包括一些RNA加工、蛋白翻译与加工、光合作用、能量代谢基因， 说明这些基础功能基冈也与南瓜抗病机制相关。 关键词：南瓜：疫霉菌；抑制差减杂交技术；cDNA文库；EST；抗病基冈 V Abstract Constructionof Subtractive Suppression fromCucurbitaInduced HybridizationLibrary by and of PhytophthoraCapsiciAnalysisExpressed SequenceTags Ab stract isannualeconomic itisa ofthe cucurbitaceae．It Pumpkin crop．Andplantgenus family has economicvalueandmedicinevalue．Asthe tradeandtheserial veryimportant foreign about areaof because productspumpkindeveloped，cultivatedpumpkinkeepsexpanding．And of more causedlossinsome economicreturns．But that，farmersgained pumpkin huge