细菌磁小体免疫光检测果树病毒的快速高灵敏度检测体系建立.pdf

摘 要 趋磁性细菌磁小体(BMPs)应用于免疫检测时具有很高的检测灵敏度，但许多方面仍然处 于未知阶段，如影响抗体连接到BMPs的环境条件、抗体连接效率(LRA)对检测灵敏度的影响 及与常用的酶联免疫吸附测定法(Enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)检测抗原的灵敏度 相比如何?有待于研究。本文以羊抗兔抗体为例，进行了抗体连接到BMPs影响因子研究，井建 立了以BMPs为抗体载体的荧光检测抗原的体系；应用所建立的检测体系对果树病毒．葡萄扇叶病 研究表明：影响抗体连接到BMPsr的冈子是多方面的，并且抗体的连接效率与检测灵敏度 有关：应用BMPs的荧光检测方法比ELISA方法灵敏105～10。倍。 由实验结果得知，许多缓冲液可以作为羊抗兔抗体连接到BMPs反应体系的缓冲液，从实验 所采用的12种常用缓冲液，在通常所使用的浓度与pH值条什r对LRA的影响研究得知，LRA 变化范围为35～95 5．6时10～20 3．5时20 5．6时1～5mM的 同。当pH mM的Tris．CI，pHmM的HEPES，pH Na3P04，其LRA明显高于其他pH值和浓度条件r的。由此得知，偏酸的环境有利于抗体连接到 BMPs，而且有机溶液的浓度较无机的高。温度对LRA也有影响，不同的连接温度使LRA达到 最高的时间不同。在4～37C之间连接抗体时，较高的连接温度使LRA达到最高所用的时间较短， 4C时需要12小时，室温(24。C)下需要4小时，37℃时需要2小时。在1ml的反应体系中抗体 用量越多，BMPs用量越少，获得的LRA越高。在lml的连接体系中，当抗体的用量为300 gg， BMPs用量为0．1 可以获得高的LRA。冷冻干燥BMPs对抗体连接效率有影响，使LRA降低；并且冷冻干燥前预 声波清洗器悬浮和摇床晃动有利于抗体的连接，缩短LRA达到最大值的时间。 抗体的连接效率与抗原检测的灵敏度有很人的关系，连接效率越高，抗原检测的灵敏度也越 高。在对ELISA和以BMPs为抗体载体的荧光检测方法比较研究表明，对兔lgG检测时，后者 的灵敏度比前者提高106倍；以羊抗兔lgG．兔lgG的抗体抗原关系所建立的麻用BMPs的荧光检 以BMPs为抗体载体的荧光检测方法检测抗原时具有很高的检测灵敏度。 关键词：细菌磁小体，抗体连接效率，检测灵敏度，兔lgG，果树病毒 Abstract on Theeffectofincubationfactorsimmobilizationof anti—rabbit efficiencyantibodies，usinggoat asan bacterial on illustration，onto theconcentrationof lgG magneticparticles(BMPs)，focusing selectionanditssuitableconditionsforthe G(IgG)andBMPs，buffer immunoglobulin conjugation，and theotherincubationfactorssuch and or as，temperatureduration，shakingstationarycondition，BMPs treatmentwerecarriedoutinthis detectionmethodWaS quailty,