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皮蠹科DNA 条码分类技术研究 中文摘要 皮蠹科DNA 条码分类技术研究 中文摘要 皮蠹科 （Dermestidae ）隶属鞘翅目 （Coleoptera ）皮蠹总科（Dermestoidea ），是 一类重要的储藏物害虫，食性杂、繁殖力强，危害严重。皮蠹科广泛分布于世界各地， 目前全世界已知1000 多种，我国约有 100 余种。种类准确识别鉴定是害虫防治的基 础，皮蠹科分类以成虫形态研究为主，幼虫形态相似较难区别，由于形态研究对鉴定 人员的分类知识和经验要求较高，实际工作中种类鉴定困难较大。近年来，快速发展 的分子生物学技术为昆虫种类的快速鉴定提供了新的方法，但皮蠹科昆虫的分子生物 学研究仍处于初步阶段，且目前的分子研究多集中于斑皮蠹属 （Trogoderma ），也未 有针对皮蠹科内相关属之间系统的分子进化研究。 本文为首次利用DNA 条形码技术对皮蠹科仓储害虫进行分类研究。从DNA 提 取方法、PCR 体系扩增进行试验探索，构建皮蠹科分子系统发育关系，初步建立起 皮蠹科基因条形码数据库，以期利用DNA 条形码技术实现对皮蠹科害虫的快速分类 鉴定。研究内容及结果包括： 1 ．研究皮蠹科形态分类，分析重要种类的鉴定特征，摄取各种的背、腹、侧面 高清图辅助鉴定。 2 ．优化DNA 提取方法，探索了不同预处理方法对DNA 提取效果的影响。经过 预处理后，一定程度上减少了基因组DNA 的断链，DNA 更易扩增长片段，且不同位 点扩增效果也较好，其中以9%NaCl 溶液 3h 预处理后的昆虫标本，利用磁珠法所提 DNA 的质量及PCR 扩增效果最佳。 3 ．建立适宜的PCR 扩增体系。反应体系中加入牛血清蛋白并增加 Mg2+浓度， 能提高PCR 扩增效率及条带质量。设计的4 对外围巢式引物以A5/A6 扩增效果最优， 最佳退火温度为49℃。基于序列分析建立的5 对巢式PCR 组合，均能适用于较低浓 度DNA 扩增。 4 ．CO Ⅰ基因 （细胞色素C 氧化酶亚基 Ⅰ基因）序列分析。所获皮蠹科CO Ⅰ基 I 中文摘要 皮蠹科DNA 条码分类技术研究 因扩增序列为前端357bp 及后端609bp 片段，分别进行拼接校正、比对，利用MEGA 分析了各序列保守位点、变异位点、简约信息位点、自裔位点、各数据组碱基组成、 碱基频率、氨基酸组成、密码子使用情况，计算各物种间的遗传距离及标准差，转换 与颠换比例。并对序列数据组系统发育信号进行检测，证实序列非随机数据，可为下 一步构建系统发育树提供依据保证。 5 ．系统发育研究。采用最大简约法（MP ）、最大似然法（ML ）两种建树方法， 对皮蠹科CO Ⅰ前、后两端序列组及其翻译的氨基酸进行分析，构建系统发育树。皮 蠹科CO Ⅰ基因后端序列片段所包含遗传信息更丰富，构建的系统发育树较少发生偏 离，同形态分类的一致性高于前端片段，更适于作为皮蠹科系统发育关系研究。 6 ．DNA 条形码初步构建。基于各物种间遗传距离、NJ 系统发育树、barcoding gap 三方面对皮蠹科CO Ⅰ基因前端序列进行分析评价，该片段完全符合DNA 条形码有 效性的检验标准，可达到种鉴定目的。利用所获的该段基因初步构建了皮蠹科3 属的 DNA 条形码。 关键词：皮蠹科；分类；DNA 条形码；CO Ⅰ基因；系统发育 作 者: 李枷霖 指导老师: 蔡 平 郑斯竹 II 皮蠹科DNA 条码分类技术研究