蚕豆萎蔫病毒胞运动管状结构及植物原生质体骨架标记技术研究.pdfVIP

摘 要 wiltvirus 蚕豆萎蔫病毒2号(Broadbean 2，BBWV2)在我国广泛发生， 对许多经济作物造成严重危害。为了弄清BBWV2在寄主植物体内的细胞间转 运机制，本论文应用电子显微镜对BBWV2的细胞病理结构进行了观察，并应 用免疫胶体金标记技术对病毒运动蛋白VP37进行了亚细胞定位。为了进一步研 究植物细胞骨架与病毒胞内运输的关系，分别以烟草BY-2悬浮培养细胞和蚕豆 叶肉细胞为材料，制备了两种细胞的原生质体，初步建立了原生质体细胞微管和 B处理对细胞骨架 微丝骨架的标记方法，并研究了抑制剂Oryzalin和Latrunculin 的影响。以上工作取得的主要结果如下： 将BBWV 2的分离物PVl31接种昆诺藜(Chenopodiumquinoa)，透射电镜 下观察感病细胞的超薄切片，发现PVl31主要引起三种典型细胞病变：膜结构 增生、细胞质内病毒结晶体、细胞质中的管状结构聚集体。此外在胞间连丝处发 2的胞间运动 现了穿越细胞壁的小管结构，病毒粒子排列其中，证明了BBWV 机制与同科的豇豆花叶病毒和葡萄扇叶病毒类似，完整病毒粒子通过胞间连丝处 小管进行运输。而细胞质中的管状结构由病毒粒子组成，仅是病毒的一种聚集方 式，与病毒的胞间运动无关。利用免疫胶体金标记技术研究了VP37蛋白在感病 细胞内的定位，胶体金颗粒主要分布于细胞质内和细胞壁胞间连丝处小管结构 上，说明VP37蛋白是小管结构的主要成分。 用酶解法分别制备了烟草BY-2悬浮培养细胞和蚕豆叶肉细胞的原生质体， 所得原生质体形态完整，活力高。用TRITC．鬼笔环肽对微丝骨架进行荧光染色， 激光共聚焦显微镜显示了原生质体中微丝精细排列的均匀网络结构。用109mol／L B处理原生质体，共聚焦成像显示了微丝解聚和微丝 和20}tmol／L的Latrunculin 骨架分布的动态过程。用小鼠p微管蛋白单克隆抗体间接免疫荧光标记原生质体 中的微管骨架，共聚焦成像显示了清晰的均匀网络结构，用109mol／L的微管解 聚剂Oryzalin处理原生质体l小时后，微管骨架被完全破坏，只能看到点状荧光 斑点或极少量的丝状片段结构。以原生质体为材料建立的微丝和微管骨架标记方 法，为进一步研究植物细胞骨架功能以及病毒的胞内运输奠定了基础。 关键词：蚕豆萎蔫病毒2号；VP37蛋白；免疫胶体金标记；胞间运动；原生质 体：微管；微丝：细胞骨架；透射电子显微镜；激光共聚焦显微镜 i Summary Broadbeanwiltvirus causedsevere to 2(BBWV2)which damagemany economichasbeen inChina．Tounderstandtheintracellular crops reportedwidely and intercellular mechanismofBBWV structure transportation 2，the cytopathological ofBBWV2was observed．ThesubcellularlocalizationofmovementVP37 protein werostudiedinthis dissertation．Tofurthet the between