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2016-02-23 发布于贵州
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玉米拓扑异构酶基因zmtop1的克隆及其表达分析.pdf

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玉米拓扑异构酶基因zmtop1的克隆及其表达分析

～目录燃黜摘要…………………………………………………………………………_一v．……．1 ABSTRACT……………………………………………………………………………………………………2 符号说明………………………………………………………………………………4 1．前言…………………………………………………………………………………．5 1．1拓扑异构酶……………………………………………………………………．5 1．1．1DNA拓扑异构酶分类……………………………………………………．．5 1．1．2拓扑异构酶I………………………………………………………………．6 1．1．3拓扑异构酶II………………………………………………………………6 1．2 DNA拓扑异构酶的作用……………………………………………………．7 1．2．1 DNA拓扑异构酶催化反应机理…………………………………………．．7 1．2．2 DNA螺旋与拓扑异构酶相互作用的新发现……………………………．．9 1．3 DNA拓扑异构酶I基因ToN的克隆与功能研究………………………．．10 1．4 DNA拓扑异构酶I亟待研究的内容………………………………………．．12 1．5半定量RT-PCR………………………………………………………………13 1．6实时荧光定量PCR……………………………………………………………13 1．6．1实时荧光定量PCR原理………………………………………………．13 1．6．2 Ct值的意义…………………………………………………………．．14 1．6．4Ct值与起始模板的关系………………………………………………．14 1．6。5荧光化学………………………………………………………………．．14 1．7本研究目的和意义……………………………………………………………15 2．材料与方法…………………………………………………………………………16 2．1供试材料………………………………………………………………………16 2．2实验方法………………………………………………………………………16 2．2．1试齐4配带0…………………………………………………………………………………………16 2．2．2玉米ZmTopl的分子克隆………………………………………………．．17 2．2．3基因表达分析材料处理与取样…………………………………………．17 2．2．4 RNA提取与检测…………………………………………………………17 2．2．4．1实验准备………………………………………………………………17 2．2．4．2 Trizol法提取总RNA…………………………………………………18 8 2．2．4．3RNA完整性及纯度检测……………………………………………．．1 8 2．2．5反转录PCR………………………………………………………………1 2．2．6半定量表达分析…………………………………………………………．19 2．2．7定量表达分析……………………………………………………………．20 2。2．8生物信息学分析…………………………………………………………．．20 3．结果与分析…………………………………………………………………………22 3．1总RNA提取与检测…………………………………………………………．．22 3．2玉米拓扑异构酶I基因全长cDNA序列的获得……………………………22 3．3拓扑异构酶I的序列比对与系统发生分析…………………………………24 3．4玉米拓扑异构酶I的保守结构域分析………………………………………27 3．5启动子分析与亚细胞定位……………………………………………………28 3．6玉米不同组织中ZmTopl基因差异表达分析………………………………29 3．7ZmTopl基因定量表达分析…………