玉米磷转运蛋白因同源序列克隆与分析.pdfVIP

中文摘要 磷是植物生长过程中所必须得一种大量营养元素，在植物体的新陈代谢中发挥了 重要的作用，因此确保作物适量的磷肥供给是提高作物单产的重要途径。然而，大部 分土壤中有效磷含量很低。从20世纪60年代至今对全球的磷矿石的储量也面临消失 殆尽，这使得对植物供磷的问题变的日益尖锐。在我国西南玉米生态区多数红壤，土 壤贫瘠，有效磷严重缺乏，更是限制玉米产量的重要非生物胁迫因素。所以，深入研 究玉米对磷转运的作用机制是寻找培育玉米高效利用土壤有效磷新品种的有效途径。 同源序列克隆法是克隆植物磷转运蛋白基因的一条新的途径。该原理是根据其它作物 已知的磷转运蛋白基因产物的保守结构区域设计引物，以植物总DNA和eDNA为模 板进行PCR扩增，得到该植物的磷转运蛋白基因同源序列，然后通过生物信息学分 析所得到的同源序列与磷转运蛋白基因的关系，确定候选基因并最终获得新的玉米磷 转运蛋白基因。相对于其他克隆方法，同源序列克隆法具有操作方便和省力等特点， 目前已经有不少磷转运蛋白基因序列通过这种方法被分离出来。在本研究中，我们通 别在根和叶中的表达情况。此外，还运用生物信息学手段，对这两个材料中克隆获得 的磷转运蛋白基因的同源序列的功能区域及同源性进行了分析，获得了如下结果： 1 以耐低磷材料“178”和低磷敏感材料“9782”的eDNA为模板，根据磷转运蛋白 基因的保守区域设计引物进行PCR扩增，获得了6条大小约为700 bp的序列和2条 大小约为1000 bp的序列条带。 h、12h、 h、6 2“178”和“9782”玉米自交系受低磷胁迫时的根和叶中7个时间段(O 24h、48h、72h、96 m磷转运蛋白基因表达差异，结果表明这8个磷转运蛋白基因 Pt3、ZeaPt7、Zea 在不同的时间段表达量不同，其中Zea 克隆片段在7个时间段表达量差异显著，从电泳检测结果可以看出这4个片段在耐低 磷材料“178”根中表达量明显高于低磷敏感材料“9782”，随着低磷处理时间的延长， 其表达量明显上调。 3 玉米已知不同的磷转运蛋白基因序列同源性高达98％、95％、93％另外有一个达到 87％。对已知基因功能分类发现：这些基因属于H2P04-／a+共转运子，在植物的根系 中负责对磷的吸收、转运，其表达受磷浓度调控。 4对所获得的序列进行克隆、测序和序列分析，结果表明有8条克隆片段具有 磷转运蛋白基因的保守结构。对这8条序列所推到的氨基酸序列进行分析表明：结果 发现这8条序列都具有该类蛋白的高度保守跨膜结构区域和功能区域，包括如蛋白激 酶C的磷酸化作用位点、酪氨酸激酶位点、酪蛋白II磷酸化位点。这些分析发现与 磷转运蛋白Phtl家族生化结构特征相印证。 关键词：玉米，磷转运蛋白基因，同源克隆，基因差异表达 Abstract in mineralsfor and natural isoneofessential growthdevelopment Phosphorus plant fertilizerthe for is pathraisingcrops ecosystems．Supplyingadequatephosphate important available isthemostco