瓜果腐霉代谢产中除草活性物质的分离与鉴定.pdf

摘 要 瓜果腐霉(Pythium 广，可引起多种植物的猝倒病和瓜果腐烂病。本实验室从黑麦草上分离到一株 具有一定除草活性的瓜果腐霉菌株PAl，本试验以PAl以及分离自黄瓜的PAC 菌株为出发菌株，通过发酵对菌株的除草活性物质的产生、分离及结构鉴定进 行了系统研究。 经对瓜果腐霉进行诱导、分离培养，得到了PAC、PAE等4个菌株，利用 种子萌发法、生长抑制作用测定法对实验室保存的PAl及上述得到的4个菌株 进行了除草活性测定，结果表明，来自黑麦草的PAl和来自黄瓜的PAC菌株分 别对马唐和反枝苋表现出了较强的除草活性，其他3个菌株则活性不明显。 对菌株PAl和PAC进行紫外诱变，分别得到了3l株和33株诱变菌株，并 对其除草活性进行了测定，结果表明，PAl菌株诱变后只有少数菌株的除草活 紫外诱变不同时间处理后得到的菌株数量不等，除草活性结果表明，除草活性 增强的菌株较多，其中PAC．M2对反枝苋的生长抑制作用较强。 利用麦麸、小米、玉米等6种固体培养基质对瓜果腐霉的PAl．M1和PAC．M2 菌株进行了固体发酵，经生物测定并结合TLC和HPLC，最终选定麦麸作为大 量固体发酵的培养基质，在此基础上，又向麦麸培养基中加入适量的牛肉膏、 蛋白胨和酵母膏，发现麦麸中加入蛋白胨可作为瓜果腐霉产生除草活性物质的 最适培养基。 利用PD培养基对PAl．MI菌株进行了液体发酵，比较了震荡和静置两种培 养方式，以及培养滤液初始pH对菌丝千重和培养滤液除草活性的影响，结果表 明，振荡方式、初始pH为5-7时，菌丝的产生量最大，培养滤液的除草活性也 最强。 对菌株PAl．M1和PAC．M2的培养滤液粗提物进行了除草活性测定，结果 性、杀草谱的检测，发现该毒素对热稳定，对供试的马唐、反枝苋、藜等杂草 均有较强的除草活性。两菌株菌丝的除草活性结果表明，PAl．M1菌丝对马唐根 和芽的IC50分别为7．36 mg／mL和4．09mg／mL，PAC．M2菌丝粗提物对反枝苋根 和芽和IC50分别为3．74mg／mL和4．76mg／mL。 利用溶剂提取、树脂柱层析、TLC、硅胶柱层析、HPLC等分离技术，对瓜 果腐霉PAl．MI菌株的液体发酵代谢产物进行了系统的研究。从菌丝中分离出 具有除草活性的化合物l和化合物2；确定了培养滤液粗提物的洗脱方案为50％ 乙醇、95％乙醇、乙酸乙酯、丙酮依次洗脱；对所得的乙酸乙酯洗脱液，95％乙 醇洗脱液和50％7．醇洗脱液分别采用不同的方法进行分离，得到了化合物3、化 合物4和化合物5、化合物6，根据标准样品及其保留时间判断化合物4为邻苯 二甲酸二甲酯。 对PAl．M1菌株的固体发酵产物利用乙酸乙酯提取，再经TLC、硅胶柱层 析和HPLC分离，得到了化合物7、化合物8、化合物9、化合物10和化合物 11． 所得到的化合物1、化合物2，化合物5一化合物10进行了结构分析，确定了化 合物7、化合物8、化合物9、化合物lO的结构分别为阿魏酸、2．(1．H．吲哚．3． 基)丁酸乙酯、阿魏酸正丁酯和2．(1．H．吲哚．3．基)己酸乙酯。化合物l为含 2与化合物l属于同一类。化合物5的分子量为306． 关键词：瓜果腐霉；除草活性；结构鉴定；TLC；HPLC；NMR andidentificationoftheherbicidalfractions by Seperation produced Pythium aphanidermatum Li-hui Applicant：ZHANG Major：PlantPathology DONG Supervisor：ProfessorJin—gao Abstract isakindof