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甘蓝夜蛾β-n乙酰葡萄糖胺糖苷酶cdna的克隆及功能研究
目 录
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摘要……………………………………………………………一 眦Y㈣Z吣7 帆7 ¨¨Ⅲ■_ ㈣4咖09吣4
英文摘要…………………………………………………………………………………………．II】
1前言…………………………………………………………………………………………………………………………．1
】．1几丁质……………………………………………………………………………………l
1．2B．N．乙酰葡萄糖胺糖苷酶的研究进展……………………………………………………2
1．2．113-N一乙酰葡萄糖胺糖苷酶基因………………………………………………………2
1．2．2
B—N．乙酰葡萄糖胺糖苷酶的功能研究………………………………………………2
1．3应用前景…………………………………………………………………………………3
1．4甘蓝夜蛾……………………………………………………………………………………．3
1．5RNA干扰……………………………………………………………………………………………………………4
1．6研究目的与意义…………………………………………………………………………．5
1．6．1研究目的……………………………………………………………………………．5
I．6．2研究意义……………………………………………………………………………一5
2材料与方法……………………………………………………………………………………6
2．1试验材料及仪器…………………………………………………………………………6
2．1．1供试虫源……………………………………………………………………………．6
2．】．2试验仪器殴备………………………………………………………………………．6
2．1．3试验所用试剂与酶……………………………………………………………………6
2．1．4质粒与茵株…………………………………………………………………………．7
2．2试验研究技术路线………………………………………………………………………8
2．3甘蓝夜蛾NAG基因克隆………………………………………………………………8
2．3．1RNA的提取…………………………………………………………………………………………………．．8
2．3．2第一链cDNA的合成………………………………………………………………．9
2．3．3目的基因eDNA序列片段克隆………………………………………………………9
2．3．4基因克隆3-RACE的试验步骤……………………………………………………12
2．3．5基因克隆5-RACE的试验步骤……………………………………………………12
2．3．6目的基因全长eDNA序列的获取…………………………………………………．．15
2．4碱基序列分析……………………………………………………………………………15
2．4．1利用Blast软件进行序列相似性检索………………………………………………16
2．4．2全长cDNA可读框架分析…………………………………………………………。16
2．5蛋白质的结构和功能分析………………………………………………………………16
2．5．1蛋白质的序列及结构分析…………………………………………………………．．16
2．5．2氨基酸序列同源性分析……………………………………………………………．16
2．5．3氨基酸序列之间的多重比对分析及进化分析………………………………………16
万方数据
东北农业大学农学硕士学位论文
2．5．4蛋白质三维结构预测………………………………………………………………一17
2．6MbNAG基因原核表达及蛋白活性检测………………………………………………．．17
2．6．1 7
2．6．2
PCR产物酶切反应…………………………………………………………………．17
2．6．3
E．coli质粒DNA提取和酶切………………………………
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