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甜瓜cmmap、cmbadh、cmp5cs基因的克隆、表达分析及遗传转化
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英文缩写符号及其中英文对照表1銎一03569
目 录
摘要…………………………………………………………………………………I
Abstract…………………………………………………………………………………………………………II
1引言…………………………………………………………………………………1
1．1MAPK的功能特点及级联信号通路……………………………………………·2
1．1．1
MAPK的结构特点……………………………………………………………“2
1．1．2MAPK的级联系统………………………………………………………………3
1．1．3
MAPKs在植物信号转导中的作用……………………………………………4
1．2
BADH基因工程研究进展………………………………………………………．．7
1．2．1胆碱单加氧酶(CMO)………………………………………………………8
1．2．2胆碱脱氢酶(CDH)…………………………………………………………．8
1．2．3甜菜碱醛脱氢酶(BADH)…………………………………………………。9
1．3脯氨酸与植物抗渗透胁迫………………………………………………………9
1．3．1脯氨酸在植物抗逆性方面的作用……………………………………………10
1．3．2脯氨酸的合成途径……………………………………………………………10
1．3．3脯氨酸的降解途径……………………………………………………………11
．． ． ． ’
1．3．4脯氨酸累积酶基因……………………………………………………………11
1．4本研究的目的意义……………………………………………………………．．13
2材料与方法………………………………………………………………………．14
2．1试验材料…………………………………………………………………………14
2．1．1植物材料及处理………………………………………………………………14
2．1．2菌株与质粒……………………………………………………………………14
2．1．3试剂盒、酶、生化试剂及实验仪器…………………………………………14
2．1．4PCR引物………………………………………………………………………………………………14
2．1．5培养基…………………………………………………………………………16
2．2试验方法………………………………………………………………………。17
2．2．1甜瓜总RNA的提取…………………………………………………………·17
2．2．2反转录eDNA模板……………………………………………………………19
2．2．3
eDNA纯化(用于5’黜妃E)………………………………………………“19
2．2．5
eDNA全长序列的克隆………………………………………………………．20
2．2．6琼脂糖凝胶电泳………………………………………………………………23
2．2．7目的片段的回收………………………………………………………………23
2．2．8连接反应………………………………………………………………………．24
2．2．9大肠杆菌感受态细胞的制备和转化…………………………………………24
2．2．10碱裂解法提取质粒DNA……………………………………………………25
2．2．11质粒DNA酶切验证…………………………………………………………26
2．2．12eDNA片段的测序及序列分析………………………………………………27
2．2．13实时荧光定量………………………………………………………………·27
2．2．14脯氨酸含量的测定…………………………………………………………·27
2．2．15
2．2．16根癌农杆菌LBA4404感受态细胞的制备与转化…………………………29
2．2．17农杆菌介导的甜瓜遗传转化………………………………………………·30
2．2．18甜瓜基因组DNA的提取(CTAB法)……………………………………31
2．2．19转基因甜瓜的PCR筛选……………………………………………………31
3结果与分析………………………………………………………………………·32
3．1甜瓜总RNA的提取……………………
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