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绿盲蝽触角均一全长cdna文库构建与化学感受蛋白基因发掘研究
符号说明
目 录
摘要…………………………………………………………………………………………………………………I
ABSTRACT……………………………………………………………………………………………………………．Ⅲ
1前言……………………………………………………………………………………………………………………一l
1．1昆虫触角感器的结构及感受机制………………………………………………………一2
12昆虫化学感受蛋白研究进展……………………………………………………………一4
1．3昆虫化学感受蛋白的种类………………………………………………………………．5
1．4昆虫化学感受蛋白的分子结构…………………………………………………………．6
1．5昆虫化学感受蛋白表达分布情况………………………………………………………．7
1．6昆虫化学感受蛋白功能…………………………………………………………………一8
1．7立题依据…………………………………………………………………………………。9
1．8研究内容……………………………………………………………………………………．9
I
2材料与方法………………………………………………………………………………一I
2．1雌雄绿盲蝽的触角cDNA文库的构建…………………………………………………ll
2．1．1试验用昆虫……………………………………………………………………………．1l
2．1．2文库构建相关试剂、仪器以及引物序列……………………………………………．11
2．1．3雌雄绿盲蝽触角总RNA的提取……………………………………………………一11
2．1．4第二链cDNA的合成…………………………………………………………………12
2．1．5eDNA的I司收…………………………………………………………………………．13
2．1．6杂交…………………………………………………………………………………………………………．13
2．1．7DSN处理…………………………………………………………………………………………………………13
2．1．8蛋白酶K处理…………………………………………………………………………14
2．1．9
Sfi酶切……………………………………………………………………………………………………………14
cⅨ呵A………………………………………………………．．15
2．1．10按照片段大小分离ds
2．1．11ds
2．1．12噬菌体颗粒的蛋白质包装…………………………………………………………。15
2．1．13
eDNA文库库容海度检测……………………………………………………………15
2．2．14
eDNA文库的转型……………………………………………………………………16
2．1．15插入片段大小PCR检测及重组率检测……………………………………………16
2．1．16冗余度检测……………………………………………………………………………16
T
2．1．17原始eDNA文库的测序……………………………………………………………．17
2．2绿盲蝽触角cDNA文库的生物信息学的分析…………………………………………17
2．2．1文库质量评估…………………………………………………………………………．．17
2．2．2聚类分析………………………………………………………………………………17
2．2．3序列比对………………………………………………………………………………l7
7
2．2．4功能注释………………………………………………………………………………1
2．2．5绿盲蝽化学感受蛋白基因鉴定………………………………………………………18
2．2．6克隆绿盲蝽化学感受蛋白基因全长序列………………………………………………18
2．2．6．1试验用虫和试剂等…………………………………………………………………一18
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