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草甘膦抗性候选因的克隆与表达研究
目录
目 录
摘昙要……………………………………………………………………………………………………………………………………．．I
英文摘要……………………………………………………………………………………………．III
l前言…………………………………………………………………………………………………l
1．1草甘膦的发展及作用机理……………………………………………………………………l
1．1．1草甘膦生产及发展………………………………。……………………………………一1
1．1．2草甘膦结构及理化性质…………………………………………………………………l
1．1．3草甘膦的特点及作用机理………………………………………………………………2
1．1．4草甘膦的优缺点…………………………………………………………………………．3
1．2草甘膦抗性资源的获得………………………………………………………………………5
1．2．1天然草甘膦抗性…………………………………………………………………………5
1．2．2细胞与组织培养…………………………………………………………………………6
1．2．3基于诱变筛选的传统育种方法…………………………………………………………6
1．2．4草甘膦靶标酶基因剧峪船及其编码基因的突变……………………………………．．7
1．2．5降解酶基因的导入或微生物降解………………………………………………………7
1．3对草甘膦产生抗性的作用机制………………………………………………………………8
1．3．1剧咯船基因的扩增或过量表达…………………………………………………………．8
1．3．2
EPSPS基因突变后的蛋白质产物对草甘膦不敏感……………………………………8
1．3．4基因产物迅速将草甘膦降解为无毒物质………………………………………………9
1．4实时荧光定量PCR方法研究概况…………………………………………………………．9
1．4．1实时荧光定量PCR简介…………………………………………………………………9
1．4．2内参基因的选择…………………………………………………………………………9
1．5本研究目的与意义…………………………………………………………………………．10
1
1．6本研究技术路线…………一二………………………………………………………………。1
2材料与方法………………………………………………………………………………………12
2．1实验材料……………………………………………………………………………………．12
2．1．1供试菌种与载体………………………………………………………………………．．12
2．1．2供试除草剂………………………………………………………………………………12
2．1．3供试培养基配置方法…………………………………………………………………。l2
2．1．4常用试剂配制方法……………………………………………………………………．．12
2．1．5试剂盒、酶及其它试剂耗材…………………………………………………………．．13
2．1．6引物…………………………………………………………………………………………………………………。13
3
2．1．7主要仪器设备……………………………………………………………………………1
2．2菌株ND．H的分离鉴定及培养条件的优化………………………………………………．14
东北农业大学硕士学位论文
2．2．218S
2．2．35．8S
2．2．4系统发育树的构建……………………………………………………………………．．16
6
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