转基因油菜转化件特异性检测技术.pdf

摘 要 根据我国法律，未经安全评价的油菜产品不容许进口和在我国种植。进入产业化的转基因品 种需要建立检测和监测方法。2004年，我国允许拜耳公司研发的6个转基因油菜品种(Msl×RFl、 RT73(GT73)作为加工原料进口。对转基因油菜及其产品进行检测和监测是实施转基因油菜安 全管理的关键。随着转基因产品的定量标识制度出台，转基因产品定性、定量检测方法的研究显 得十分迫切和重要。本实验以德国拜耳公司培育的6个转基因品种(MSl×RFl、MSlXRF2、MS8 和T45转化事件特异性定性、定量检测方法。并且对每个检测体系的特异性、灵敏度、重复性、 准确性及可靠性进行了验证。 LOD(1imitofdetection)和LOQ(1imitofquantification)分别为2．5个拷贝和25个拷贝。 RFIRG／RFlRV和RFILG-F／RFlLV-R扩增片段大小为99bp、284bp，检测灵敏度均为5个拷贝 (O．013％)，定量引物RFlRG／RFlRV和RFlLG／RFILV扩增片段大小为99 bp、117bp，建立的标 准曲线决定系数R2值分别为0．996和O．988，LOD值均为5个拷贝；LOQ为25个拷贝。 和LOQ分别为5个拷贝和25个拷贝。 和LOQ分别为20个拷贝和25个拷贝。 LOQ分别为20个拷贝和25个拷贝。 oxYLG／oxYLV和oxⅥⅪ／oxⅥw扩增片断大小发分别为105 bp，124bp，检测灵敏度分别是 LOD值均为10个拷贝或接近10个拷贝；LOQ值均为50个拷贝。 LOD和LOQ分别为5个拷贝和50个拷贝。 减。选用引物对T45LG／T45LV建立定量检测方法，建立的标准曲线决定系数僻)为0．996。 本研究所建立的事件特异性定性检测方法可以识别特异的转基因油菜品系、定量检测方法可 以准确定量样品中特异转基因油菜成分的含量，为我国转基因油菜的安全管理和即将实施的定量 标识提供了技术支持和科学依据。 关键词：转基因油菜，转化事件，旁侧序列，事件特异性定性、定量检测方法 II Abstract tothe ofGMO in arenot allowed AccordingregulationsbiosafetymanagementChina,transgenic crops andcultivationwithout the certificate．Thevarietiesthathave biosafety import obtaining transgenic been for to methodsofdetectionand commercialization，are approved requiredprovide monitoring．In varieties and 2004，six oftransgenic andone Monsanto were CropsciencevarietyRT73(GT73)from T45)developedbyBayer company