鸭梨acc氧化基因克隆及反义转化与枣遗传连锁图谱的加密的研究.pdfVIP

摘要 梨和枣均是我国重要的经济树种，在我国栽培面积极广，是我国农业经济的重 要组成部分。深化对这两种果树的分子生物学研究，并应用生物技术对其进行遗传改 良，对于加速育种进程至关重要。在本研究中，围绕梨和枣分别开展了基因克隆、遗 传转化、遗传图谱加密和QTL分析等一系列研究，填补了相关研究的空白，并为今 后生物技术在果树育种中的进一步应用增添了新的理论依据。取得的主要成果如下所 示： 1．根据ACC氧化酶保守序列设计一对引物，以鸭梨果实eDNA为模板扩增得到 果显示该基因有4个外显子和3个内含子组成，外显子和内含子的长度分别为942bp 和634bp。 2．对鸭梨ACC氧化酶基因所翻译的氨基酸序列进行生物信息学分析，结果表明 该氨基酸序列与其它14种植物的ACC氧化酶高度同源，包含一个92个氨基酸残基 超级家族的异青霉素合酶(IPNS)家族，该家族酶成员在发挥酶促作用时不需要以 2-OG作为辅因子。 3．对所获得的鸭梨ACC氧化酶氨基酸序列进行二级结构和三级结构预测，结果 发现该蛋白疏水性氨基酸位于分子内部，亲水性氨基酸位于分子表面，具有可溶性亲 水蛋白的典型特征，不属于膜内在蛋白；但研究同时发现该蛋白具有3个豆蔻酰化位 点，豆蔻酸可以通过与这些位点的甘氨酸残基相连接将鸭梨ACC氧化酶以可逆共价 连接的方式锚定在膜上，故推测鸭梨ACC氧化酶应该是具有酰胺．连接豆蔻酰锚钩结 构的脂锚定膜蛋白。 组中的拷贝数及在不同组织中的表达情况，结果发现该基因仅在生殖器官中表达，且 在基因组中以单拷贝形式存在，说明该基因主要参与系统II型乙烯的内源合成，而系 统I型乙烯的合成是由与该基因同源性较低的另外ACC氧化酶家族成员控制的。鸭 梨上应至少存在两个ACC氧化酶基因家族成员。 导下对鸭梨组培苗进行了遗传转化，经PCR鉴定证实共有4株鸭梨组培苗中外源基 贝外，其余3株中外源基因均以单拷贝形式存在。 6．对影响ISSR扩增的因素进行了优化，建立了枣属植物最适ISSR扩增反应体系， xPCRBuffer、2．0 mmol·L-1 mmol·L-1dNTP、1．5u 即259L反应液中包含1 M孑+、0．25 Taq 酶、1．251amol·L。1引物和50ng模板，PCR反应的最适退火温度为58℃。 ISSR标记44个，其中34个被成功加入到了已有的枣遗传连锁图谱中，使图谱总图 的标记空缺，使枣遗传连锁图谱的饱和度得到了进一步提高。 8．比较了枣针刺长度相关性状包括中心干上长针刺长度、中心干上短针刺长度、 二次枝上长针刺长度和二次枝上短针刺长度QTL在新构建的遗传连锁图谱和原图谱 上的定位结果，发现仅有10个QTL位点一致，证实遗传连锁图谱的饱和度是影响 QTL定位精确性的重要因素之一，同时也推测这lO个QTL位点可信度较高，与其 紧密连锁的标记可为日后分子标记辅助育种提供指导。 关键词：鸭梨；枣； ACC氧化酶；基因克隆；生物信息学分析；反义RNA技 术；遗传转化；遗传连锁图谱；QTL分析 forACCOxidaseGene The of andAnti-transformation StudyCloning of bretschneideri Chinese Rehd．)andDensity-increasing Genetic Jujube’S LinkageMap Author．QiJing Major：Pomology Supervisor：ZhangYu-xing