第十九章平面色谱法修改精要.pptVIP

教学目标 1.掌握平面色谱法的基本分离原理及相关参数的计算（比移值、相对比移值、分离度）；薄层色谱法的特点；吸附薄层色谱中吸附剂和展开剂的选择原则。 2.熟悉薄层色谱法的主要操作步骤。 3.了解薄层扫描法的应用及技术；纸色谱法的分离原理及色谱条件。 第一节　平面色谱法的分类和原理 　 薄层色谱法： 纸色谱法 　 薄层电泳法 二、平面色谱法参数 （一）定性参数 1. 比移值Rf(retardation factor；Rf) Rf范围： 0 Rf 1 Rf = 0.2~0.8（常用） Rf = 0.3~0.5（最佳） L0 2. 相对比移值Rr 讨论 （1）参考物与被测组分在完全相同条件下展开 可以消除系统误差，大大提高重现性和可靠性； （2）参考物可以是后加入纯物质，也可是样品中已知组分 （3）相对比移值Rr与组分、参考物性质及色谱条件有关， 范围可以大于或小于1 例1：化合物A在薄层板上从原点迁移7.6cm，溶剂前沿距原点16.2cm，（1）计算化合物A的Rf。（2）在相同的薄层色谱展开系统中，溶剂前沿距原点14.3cm，化合物A的斑点应在此薄板何处？ 例2：样品和标准品经过薄层分离后，样品斑点中心距原点9.0cm，标准品斑点中心距离原点7.5cm，展开剂前沿距原点15cm，试求样品及标准品的Rf值和Rr值？ （二）相平衡参数 相平衡参数：分配系数K和容量因子k 前面推导出 Rf＝L/L0=ut/u0t，定时展开时R’＝ Rf 讨论 ⑴ Rf与K有关，即与组分性质（溶解度）以及薄层板 和展开剂的性质有关，K↑大，Rf↓小 ⑵薄层板一定，Rf只与组分性质有关，对于极性组分， 展开剂极性↑大，Rf↑大（容易洗脱） 展开剂极性↓小，Rf↓小 （不容易洗脱） ⑶Rf＝1 K=0 组分在前沿 Rf＝0 K=∞ 组分在原点 0.01K100 （三）分离参数 1.分离度(resolution; R) R=2(L2-L1)/(W1+W2) =2d/(W1+W2) 一、主要类型 （一）吸附薄层色谱 一、主要类型 （二）分配薄层色谱 固定相为液体，吸留在载体上的薄层色谱。利用被分离组分在固定相与流动相中的分配系数不同而被分离。常用的是反相薄层色谱法，固定相是烷基化学键合相，展开剂是水及与水相溶的有机溶剂。 一、主要类型 （三）高效薄层色谱 与经典薄层色谱法相比，具有分离效率高、分析速度快、检测灵敏度高等特点 二、吸附剂和展开剂 （一）吸附剂 硅胶：多孔性微粒，表面带有硅醇基，呈弱酸性。 原理：硅醇基(吸附中心)与极性基团形成氢键（吸附性）。 组分与硅醇基形成氢键（被吸附）的能力不同而分离。 　　 应用：酸性和中性物质的分离，如有机酸酚类、醛类等 活度与含水量的关系： 含水量高，活性级别越高，活度越低。 活化：加热至105~110℃左右，除去吸附水提高活度。 （注意温度不可过高） 分离效率：与其粒度、孔径及表面积等有关。 常用硅胶： 硅胶H，不含黏合剂 硅胶G，含煅石膏 硅胶GF254，含煅石膏和一种无机荧光剂，即锰激活的硅酸锌，在254nm紫外光下呈强烈黄绿色荧光背景。 氧化铝 碱性氧化铝(pH9.0)——分离中性或碱性化合物，如生物碱、脂溶性维生素等； 中性氧化铝(pH7.5)——分离酸性及对碱不稳定的化合物； 酸性氧化铝(pH4.0)——酸性化合物的分离。 含水量越高，活性越弱。 吸附剂与展开剂的选择 展开剂的选择 根据被测组分、吸附剂 和展开剂本身的极性 展开剂 混合溶剂 先用单一溶剂展开，若Rf值太小，则加入一定量极性强的溶剂， 如乙醇、丙酮等， 如果Rf值太大，则加入适量极性弱的溶剂(如环己烷、石油醚等)，以降低极性。 可加入一定比例的酸或碱,使斑点集中。 三、操作方法 定性分析——窄条 定量分析——10×20cm 展开： 层析缸，预饱和，防止边缘效应浸入展开剂深度 0.5?1.0cm，展开至整板3/4距离,标记。 四、定性和定量分析 六、薄层扫描法 薄层扫描法是用一定强度光束照射薄层上的斑点，用仪器测量照射前后光束强度的变化，从而求得物质含量的方法。 检测方法 吸收测定法和荧光测定法 测量方法 投射法和反射法 扫描方式 单波长和双波长 定量方法 外标两点法定量 第四节