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第三节：分子标记 1、几种主要分子标记简介 2、植物核酸的提取 3、PCR技术 4、Southern杂交技术 1、几种主要分子标记简介 1）RFLP标记 RFLP标记基于Southern杂交技术。 限制性片段长度多态性。 这种多态性是由于限制性内切酶酶切位 点或位点间DNA区段发生突变引起的。 2）RAPD 标记 随机引物PCR标记。 模板DNA扩增区段上引物结合位点碱基发生突变或扩增片段之间发生插入突变或缺失突变，因此表现为扩增产物的有无或片段的大小的差异。 RAPD通常是显性的——片段的有无。 有时为共显性——片段的大小的差异。 RAPD所用引物通常为9—10个碱基，因此，PCR要用较低的退火温度（36℃ ）。 3)SSR标记 SSR是特异引物的PCR标记。称为微卫星或简单重复序列。 重复单元为几个核苷酸，重复次数一般为10-50个。 由于基本单元的重复次数不同而形成SSR座位的多态性。 根据SSR座位两侧序列设计一对特异引物来扩增SSR序列。 经聚丙烯酰胺凝胶电泳，比较扩增带的迁移距离，就可 知某个SSR座位上的多态性。 优点：多态性十分丰富，共显性。 缺点：引物设计比较困难。 4）AFLP标记 AFLP是基于限制性酶切和PCR的DNA标记。 将样品DNA用限制内切酶进行酶切，再对酶切片段进行有选择地扩增，检测其多态性。 5) CAPS标