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乌贼墨多酚氧化酶的特性研究 摘要 本研究以乌贼墨为材料，用0．05mol／L pH7．2的磷酸盐缓冲液提取 多酚氧化酶(PPO)，得到粗酶液，用饱和度为30％一80％的硫酸铵分 CL．6B层析柱分离，得到两个具有PPO 级沉淀并通过DEAE—Sepherose 活性的蛋白色谱峰。第一个峰的酶活性较弱．第二个色谱峰的酶活性 较强，合并具有较高酶活性的柱洗脱液后，经透析、浓缩后纯化倍数 达12．2倍，以此用于酶的特性研究． ， f纯化后的酶液以多巴为底物，最适温度为60。C，在40。C以下，该 k 酶表现出较高的稳定性，当温度高于60。C时酶迅速失活。该酶的最适 子对该酶活性影响的研究表明， 在umol／L水平，铜离子对该酶有激 活作用。在mmol／L水平，一价金属离子Na+和K+以及二价金属离子 和铅离子对该酶具有强烈抑制作用，且抑制效率与离子浓度成正比。 通过无机阴离子对该酶的效应研究表明，在无机阴离子中HS0。对酶活 性有强烈抑制作用，在lOmmol／L时抑制效率达100％，而c1一、Br一、 I一和S0。2一对PPO活性无显著影响。采用蒽酮法测定，发现酶液中含O．04 ％的糖，故初步推断该酶为糖蛋白。该酶对单元酚(L一酪氨酸)不表 现出活性，对二元酚(邻苯二酚和DL一多巴)和三元酚(焦性没食子酸) 表现出不同的酶活性，其大小顺序为：邻苯二酚、DL一多巴、焦性没食 子酸。通过Km值的测定表明，此酶对DL一多巴的Km值为5．9mmol／L， 对邻苯二酚的I(m值为1．6珈nol／L。 硫酸铵分级沉淀后的酶液经非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分 离，采用考马斯亮蓝R一250染色和酶一底物(邻苯二酚)活性染色， 显示出两条活性带，推断乌贼墨中存在两种PPO同工酶。经 CL一6B层析柱分离得到的两个具有PPO活性的色谱 DEAE—Sepherose 峰，即为同工酶I和同工酶II。用SDS．聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS)测定，两种同工移率分别为0。52和0。55，对 应分子量为53．4KD和48．3KD 通过该酶的特性研究，为乌贼墨的形成机理提供了理论线索，还 有助于解决防止果蔬酶促褐变和虾类等黑变的问题。 ’ ～ 。 关键词：乌贼罗，多警氧譬酶嗲，酶笆步交‘琴誉’ ＼／7 o+ of oxidasefrom polyphenol cuttlefish(Sepia Properties esculeuta Hoyle)ink ’ Abstract ink with extractedfromcuttlefish oxidase(PPO)was Polyphenol 0．05mol／L sodium extractionbuffer．Thecrudeextract pH7．2 phosphate withsolidammoniumsulfateof wasfractionated Was and